胰岛素样生长因子基因表达和人类植入前胚胎发育的研究

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1、胰岛素样生长因子基因表达与人类植入前胚胎发育的研究中文麓蔓选择扩增IGF—I及IGF一Ⅱ基因，内参照选择基因13-actin。扩增产物行琼脂糖凝胶电泳。结果：人类未受精的卵母细胞及植入前各阶段胚胎(2细胞期、4细胞期、6细胞期、8细胞期、桑椹胚及囊胚)均未检测到的IGF-I表达，而所有的卵母细胞及胚胎均有IGF一1I的表达。第二部分胰岛素样生长因子-II基因表达与人植入前胚胎的质量的研究材料：收集2004年4月～7月于中山大学第一附属医院生殖中心行常规IVF和ICSI患者及PGD后不适合移植及冷冻保存的胚胎172个。其中3PN胚胎44

2、个，2PN胚胎128个。每一个胚胎均进行常规的胚胎评分(包括原核期评分和第三天的细胞数及分级)。方法：首先建立荧光定量RT-PCR检测IGF-IImRNA标准曲线，单个细胞裂解液制备植入前胚胎的RNA，逆转录合成cDNA后进行荧光定量PCR反应，反应结束，真接机器阅读荧光结果。Macintosh电脑根据阳性定量模板和待测样品的扩增情况，算出反应体系中待测样品中eDNA的拷贝数。结果：按细胞数对胚胎进行分组后，2PN胚胎中细胞数≤4个、细胞数5～6个、细胞数≥7三组之间IGF—IImRNA含量是有差异的(P<0．01)：3PN胚胎中三组

3、之间IGF—IImRNA含量也有显著性差别(P<0．05)；但2PN胚胎和3PN胚胎之间IGF-IImRNA含量是没有统计学差异的(P>0．05)。且每一组中不同分级胚胎之间IGF-IImRNA含量是没有统计学意义的(P均>O．05)。来源于妊娠组胚胎中IGF—nmRNA含量较非妊娠组的胚胎显著增高(P<0．05)。人类植入前胚胎IGF—IImRNA的含量与患者年龄呈负相关(相关系数R=·0．323，p=0．042)。来源于原发不孕和继Ⅱ胰岛素样生长因子基因表达与人类植入前胚胎发育的研究中文■夏发不孕患者的胚胎中IGF—IImRNA含

4、量差别没有统计学意义(P=0．487)；来源于常规IVF或ICSI患者的胚胎中IGF—IImRNA含量是没有差别的(P=0．950)；患者的不孕年限于其胚胎中IGF—IImRNA含量无相关性(相关系数R=0．093，P=O．569)。结论1．人类未受精的卵母细胞及植入前各阶段胚胎均未检测到IC珩一I表达，而所有的卵母细胞及各阶段胚胎均有IGF—II的表达。2．荧光定量RT-PCR技术可用于检测单个植入前胚胎的mRNA含量，从而可作为一个更为精确的进行胚胎早期发育调控研究的实验工具。3．IGF—II可作为胚胎质量的标记物；IGF一Ⅱ基因

5、表达量和胚胎的形态学评分呈乖相关。4．年龄较轻和妊娠的病人中其胚胎中IGF—II的基因表达量较高。关键词：胰岛素样生长因子植入前胚胎荧光定量RT-PCRⅡI——一一堕堂至壁竺堡旦王茎旦耋堕皇叁耋垫垒堑墅堕垄童竺婴窒茎塞苎塞Researchontheroleofinsulin—likegrowthfactorsinhumanpreimplantationembryosdevelopmentCandidater：WangLijuanSupervisor：ProfessorZhouCanquanARTcenter,DepartmentofO

6、bstetricsandGynecology,FtrsfAffiliatedHospitalofZhongshanUniversity,Guangzhou，510080AbstractObjective：Toinvestigatetheexpressionofinsulin—likegrowthfactors(IGFs)inhum柚preimplantationembryoswithnestedreversetranscription—polymerasechainreaction(RT-PCR)andtoexploretheeffe

7、ctsofIGFsonhumanembryosgrowthanddevelopment．Furthermore，wetrytoexaminethesuitabilityoffluorescencemonitoredreversetranscription(RT-PCR)forthestudyofsinglepreimplantationembryo’sgeneexpressionandtoapproachtherelationshipbetweenIGFscomentandthequalityofhumanembryos．PartIE

8、xpressionofinsulin-likegrowthfactorsinhumanoocytesandpreimplantationembryosMaterials?Intotal25unfertilizedoocy