大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究

《大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国海洋大学硕士学位论文大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究姓名：胡健申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：温海深201206大菱鲆类胰岛索样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究大菱鲆类胰岛素生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究摘要大菱鲆@印^脯口砌淞m似拥淞)为我国北方沿海主要养殖品种，具有重要的经济价值。本文以人工养殖大菱鲆为研究对象，采用分子生物学相关技术方法，对IGF信号系统相关基因IGF．2，IGFBP．1，IGFBP．2在大菱鲆胚胎及仔稚鱼时期的功能进行了分析，结果如下：1．大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一1(IGFBP一1)基因克隆与表达本实验克隆得到

2、大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一l(IGFBP．1)基因cDNA全长为1179bp，其中35bp一775bp为编码区，共编码247个氨基酸，氨基酸序列包括3个区域，分别为保守的N端和C端以及高度分散的L区域，并且在N端和C端存在18个半胱氨酸残基。组织表达分析表明，IGFBP．1基因在肝脏、脾、心脏、胃、肾脏、肠中均有表达，其中以肝脏和脾中的表达量最为丰富。通过RP．PcR方法检测IGFBP一1基因在大菱鲆胚胎及仔稚鱼时期的表达情况，从未受精卵开始表达，在原肠期达到最低，在之后的发育期里显著升高，并在稚鱼期达到最高值。结果表明，IGFBP．1基因在大菱鲆的早期发育过程中起着重要的生理作用。2

3、．大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一2(IGFBP一2)基因的克隆和表～．L还采用RACE克隆方法得到大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一2(IGFBP-2)基因cDNA全长1057bp，其中43bp一852bp为编码区，共编码270个氨基酸，同IGFBP．1基因类似，氨基酸序列包含3个区域，分别为保守的N端和C端以及高度分散的L区域，在N端和C端存在18个半胱氨酸残基。组织表达分析表明，IGFBP．2基因在大菱鲆成鱼各组织中分布广泛，在脑、心、肝、肾、肠中表达量较丰富，皮、脾次之，鳃和卵巢较少，胃中有微弱表达，肌肉中检测不到表达。大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究使用RT-

4、PCR的方法检测IGFBP．2基因在大菱鲆胚胎及仔稚鱼发育期的表达，可以发现，在未受精卵和原肠期中没有表达，从胚体期开始检测到表达，并在后面的几个时期逐渐上升，13日龄仔鱼达到最高，稚鱼略有下降，但差异不显著，表现出与IGFBP．1基因不同的生理作用。3．大菱鲆类胰岛素样生长因子一2(IGF一2)基因的克隆及两种类胰岛素样生长因子(IGF一1，lGF一2)基因的表达采用同样的方法克隆得到大菱鲆类胰岛素样生长因子一2(IGF．2)基因cDNA全长共880bp，其中166bp一823bp为编码区，共编码219个氨基酸。整个氨基酸序列包括信号肽区，高度保守的B，C，A，D区域，以及E区域，其中在B区

5、域和A区域中包含6个半胱氨酸残基。采用RP．PCR方法检测IGF．1和IGF．2基因组织表达，发现这两种基因均有较广泛的表达模式，其中IGF．1基因除了在肠中没有检测到表达，其他组织均检测到表达，肝脏中的表达量最丰富；IGF．2基因在所有组织中均检测到表达，肌肉中的表达量较低。在胚胎仔稚鱼发育期内‘，IGF．1基因除了在未受精卵内表现出一个较高的水平，从原肠期开始，表达水平逐渐上升；IGF．2基因在原肠期表现出一个较高的表达量，其他各期均有表达，差异不显著。关键词：大菱鲆(兜印，7拍a，删s腑x，删s)类胰岛素样生长因子结合蛋白一1，一2(IGFBP一1，一2)类胰岛素样生长因子一1，一2(I

6、GF一1，一2)大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究StudiesoncloningandexpressionanalysisofIGFandIGFBPgenesinturbot做叩^历口加珊，咒皿砌“s)AbStractAsoneof也emainseawaterbreedingsintllenorthcoaStalareaofChina，tIlrbot(＆op^搋口Zm懈m锻fm獬)hausimp删economicVa：Iue．Thispapermainly咖dy0ncultu溉ltIlrbot，缸}m砒dch也erelatjVegeneofIG限Si萨a1syst锄IGF

7、．2，IGFBP．1，IGFBP-2aresmdiedaIldtak钮bythem如odsofm01ecularbiologyindetails．Them咖resultSandconclusionsareasf01lows：1．CloningandexpressionanalysisofInsulin—likegrowthfactorbinmngprotein-1(IGFBP一1)intIlrbo