花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控

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1、分类号密级UDC研究生学位论文花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控研究生姓名钱焜指导教师姓名温海深申请学位级别硕士专业名称水产养殖论文答辩日期2013年5月27日学位授予日期2013年6月中国海洋大学谨以此文献给我敬爱的导师温海深教授挚爱的父亲、母亲以及所有关心和帮助我的朋友！---------钱焜花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：i花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控独创声明本人声明所呈交的学位论

2、文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、

3、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编ii花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控摘要花鲈（Lateolabraxjaponicus）是我国广泛养殖的经济鱼类

4、，本文以山东省青岛市沿海网箱养殖花鲈为对象，利用分子生物学方法研究了花鲈类胰岛素生长因子（Insulin-likegrowthfactors）家族几个关键基因的全长cDNA克隆与表达调控。这些基础性资料丰富了花鲈IGF家族研究的空白，为揭示该家族基因表达调控及其具体生理功能奠定了分子生物学基础。1花鲈IGF-1，IGF-2基因克隆与表达分析本实验利用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆得到了花鲈IGF-1和IGF-2基因cDNA全长序列，IGF-1全长876bp编码185个氨基酸，IGF-2全长798b

5、p编码215个氨基酸。利用各种生物分析软件和生物网站对其氨基酸结构进行了分析比对，发现二者进化地位保守，前体蛋白都包含信号肽区域，B，C，A，D，E结构域，并且二者均具有与受体和结合蛋白结合的功能结构。利用荧光实时定量PCR技术对花鲈脑，垂体，心脏，鳃，胃，盲肠，肠，头肾，肾脏，肝脏，性腺（雄），脾脏，肌肉这13个组织的IGF-1和IGF-2mRNA的表达水平进行了分析。结果显示，花鲈IGF-1mRNA在肝脏转录水平最高，肠、盲肠、肌肉、脾脏表达较多，而其他组织表达量较少。花鲈IGF-2mRNA在检测的13个组织中均有表达，其中心脏表达最丰富

6、，在脑、鳃、胃、盲肠、肠、肾脏、性腺、脾脏、肌肉中有较多的表达，垂体、头肾、肝脏表达较少。2花鲈IGFBP-1，IGFBP-2基因克隆与表达分析本实验利用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆得到了花鲈IGFBP-1和IGFBP-2基因cDNA全长序列，IGFBP-1全长1779bp，编码248个氨基酸，IGFBP-2全长815bp，编码267个氨基酸。花鲈的IGFBP-1和IGFBP-2氨基酸序列同其他硬骨鱼类一样都包括C-端结构域，N-端结构域，以及多变的中央L-结构域。并且二者均存在18个保守的半胱

7、氨酸残iii花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控基以维持氨基酸二级结构的稳定，同时也都拥有N-端结构域的CGCCXXC-box和C-端结构域的CWCV-box，他们都是与IGF配体结合的重要结构。此外，IGFBP-2的C-端结构域还存在一个RGD结构，它能够与整合素相互作用，介导细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的粘附作用。利用荧光实时定量PCR技术对花鲈脑，垂体，心脏，鳃，胃，盲肠，肠，头肾，肾脏，肝脏，性腺（雄），脾脏，肌肉这13个组织的IGFBP-1和IGFBP-2mRNA的表达水平进行了分析。荧光实时定量PCR结果显示

8、，花鲈IGFBP-1mRNA表达量较为广泛，在肝脏中的转录水平最高，在肌肉、脾脏有较多的表达。而花鲈IGFBP-2mRNA仅在肝脏中的表达水平最高，在肌肉中有较少的