鹅tlr2-1、15基因的克隆、组织表达谱分析

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1、广东海洋大学硕士学位论文鹅TLR2--1、15基因的克隆、组织表达谱分析姓名：华国洪申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：贾汝敏；巨向红201206鹅TLR2．1、15基因的克隆、组织表达谱分析摘要Toll样受体(Toll．1ikereceptors，TLRs)是一类重要的模式识别受体(pathogenrecognizereceptors，PRRs)，通过识别保守的病原相关分子模式(pathogenassociatedmolecularpatterns，PAMPs)启动先天性免疫应答。Toll样受体不仅参与非特异性免疫(天然免疫)，也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。为解析

2、Toll样受体在鹅抗感染免疫中的作用机制，并为抗病育种积累可供选择的基因素材，本研究以马岗鹅为实验对象，采用RT-PCR、SMART-RACE及生物信息学分析技术，克隆了鹅TLR2．1、15全长基因，分析了其分子特征；qRT-PCR技术，定量分析了其在健康鹅体内各组织的表达谱。结果表明：(1)鹅TLR2．1cDNA序列全长3119bp，包括359bp的5’非编码区、378bp的3’非编码区和编码783个氨基酸的2382bp的开放阅读框，分子量为90．17kDa、PI为7．73。TLR2．1全长氨基酸序列包含1个信号肽、9个富含亮氨酸的重复序列(Leucine．richRepeat,LRR)、

3、1个跨膜结构域和1个胞内TIR结构域(IL．R1homologousregion,TIR)。同源比对显示，鹅TLR2．1与其他已报道脊椎动物的TLR2．1具有较高的同源性(39．6．84．6％)。组织表达分析显示，TLR2在健康鹅的组织中具有较广的表达分布，其中在肾脏、法氏囊、皮肤、脑组织中表达量较高。(2)鹅TLRl5cDNA序列全长2805bp，包括114bp的5’非编码区、93bp的3’非编码区和编码865个氨基酸的2598bp的开放阅读框，分子量为98．85kDa、PI为7．25。TLRl5全长氨基酸序列包含1个信号肽、64"富含亮氨酸的重复序列、1个跨膜结构域和1个胞内TIR结构域

4、。氨基酸结构分析、多序列比对和进化树分析都表明，TLRl5与其他物种TLRs之间有较高的氨基酸相似性，与鸡TLRl5的同源性最高(83％)。组织表达分析显示，TLRl5在健康鹅的组织中具有较广的表达分布，其中在肌胃和肌肉组织中表达量较高。关键词：鹅，Toll样受体，基因克隆，基因表达，免疫MolecularCloningandTisssuesExpressionProfileofgooseTLR2--1and15GeneAbstractToll—likereceptors(TLRs)areconsidered硒keysensorstotriggerthehost’Sinnateimmunes

5、ystemandadaptiveilTlrtluneresponsesbyrecognizingvariousPAMPsandinitiatingsignaltransduetion．TLRshaveacentralroleininnateimmunityandarealsorequiredforthedevelopmentofanadaptiveirflmuneresponse，bridginginnateandadaptiveimmunity．ThepresentstudywasconductedtoexplorethepotentialroleofTolllikereceptoront

6、hegooseimmunity,andaccumulatealternativegeneticmaterialforthegoosebreedingfordisease-resistant．WeclonedthecDNAofTLR2-1and15byRT-PCR,SMART-RACEinMaGanggoose，aswelltheirexpressionprofileindifferenttissuesbyqRT-PCR．Theresultsshowedthat：(1)TheclonedgooseTLR2-lfulllengtheDNAexhibited3119bpinlength，inclu

7、dinga5'-terminal(UTR)of359bp，a3'-terminalfOTR)of378bpandanopenreadingframe(ORF)of2382bpencoding793aminoacideshasacalculatedmolecularmassof90．17kDa,atheoreticalpIof7．73，andaputativesignalsecretionpeptide33勰i