莪术油对人卵巢癌skov3细胞及顺铂耐药细胞skov3ddp的影响以及联合tc方案化疗的价值

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1、河北医科大学硕士学位论文莪术油对人卵巢癌SKOV3细胞及顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的影响以及联合TC方案化疗的价值姓名：李艳芳申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：史淑红201203中文摘要莪术油对人卵巢癌SKOV3细胞及顺铂耐药细胞SKOV3／DDP的影响以及联合TC方案化疗的价值摘要目的：卵巢恶性肿瘤的发病率在妇科恶性肿瘤中占第三位，但是其死亡率居首位，其中上皮性恶性肿瘤最常见，发病多隐匿，故多数患者初诊时已是中晚期。目前，国内外对于中晚期卵巢癌的标准治疗方法是理想的肿瘤细胞减灭术加术后以铂类为基础的联合化疗

2、，但是治疗效果仍然很不满意。肿瘤细胞对铂类耐药性的产生是化疗失败的主要原因，另一方面化疗药物的毒副作用依然不容忽视。如何减轻化疗药物的毒副作用、逆转卵巢癌细胞的耐药等问题仍然是目前研究的热点和难点。祖国传统医学是中华民族之精粹，中西医结和防治肿瘤是我国治疗疾病的一大特色，近年来也受到了国际上的关注。莪术是中国的传统中药，其功在于破血行气，消积止痛，其主要成分为莪术挥发油。随着现代药理研究的深入和各种制剂的开发，莪术油在抗病毒方面、免疫调节、抗肿瘤方面研究日益增多。已有学者发现，莪术油对宫颈癌细胞、子宫内膜癌细胞有明显的抑

3、制作用，但在卵巢癌方面的研究报道较少，对卵巢癌耐药性的研究亦未见报道。本研究目的在于：1、以人卵巢上皮癌SKOV3细胞株为研究对象，观察不同浓度的莪术油注射液对该细胞增殖的影响，计算半数抑制浓度；2、探索莪术油在联合TC方案(紫杉醇／卡铂)化疗中发挥的角色；3、进一步探索莪术油是否可以逆转SKOV3／DDP细胞株的顺铂耐药性，从而为卵巢癌的治疗寻找低毒、高效的天然药物及其新的化疗方案。方法：1、细胞培养：体外常规培养人卵巢上皮癌细胞株SKOV3及其顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP；2、利用噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓

4、度的莪术油对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用，计算莪术油IC50，同时利用倒置显微镜观察莪术油对SKOV3细胞形态学的变化；3、细胞计数法绘制SKOV3细胞在含有半数抑制浓度莪术油的完全培养基中的生长曲线(1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d)，并用常规培养基作对照，利用台盼兰染色法区别活细胞及死细胞；4、流式细胞技术检测半数抑制浓度莪术油对SKOV3细胞周期的影响；5、利用MTT比色法计算紫杉醇、卡铂对SKOV3中文摘要细胞的IC50，IC40、IC30，再将其分别联合半数抑制浓度的莪术油作用于SKOV3细胞，观察

5、抑制率，评价莪术油在其中的价值；6、计算顺铂耐药细胞株SKOV3flDDP的顺铂耐药指数。公式：耐药指数(RI)=鲁墓器IC50即RI=型塑SK兰O塑V3嬲ICSO；7、以人卵巢敏感细胞细腮上皮性恶性肿瘤顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP为研究对象，分为4组：莪术油联合顺铂组、顺铂组、莪术油组、和空白对照组，观察莪术油对顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP顺铂耐药性的影响。结果：1、莪术油对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖有明显的抑制作用，其抑制作用随着莪术油浓度的增加而增加，IC50=34ug／ml；2、莪术油对人卵巢癌SKOV

6、3细胞的生长曲线有明显的抑制作用，抑制作用以第二个24小时最明显；3、无论是莪术油作用24小时，还是48小时，周期中各个时相的构成较对照组均有明显的变化，G1期细胞比例均较对照组明显增加(P<0．01)；4、高浓度的紫杉醇／卡铂对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用，无论是否联合莪术油，其对SKOV3的抑制率均高达95％以上，无统计学意义(P>O．05)；两个紫杉醇／卡铂低剂量组联合莪术油，对细胞的抑制作用均高于单纯应用紫杉醇／卡铂(P

7、制作用与单纯高浓度的紫杉醇／卡铂抑制作用无差别(P>O．05)。5、耐药指数RI=9．97，该顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP耐药性可靠；6、单纯应用顺铂组对SKOV3／DDP的抑制率仅为3．74％，与空白对照组比较P>O．05。而莪术油联合顺铂对顺铂耐药细胞株SKov3／DDP的生长抑制率为66．01％，单纯应用莪术油抑制率为49．75％。莪术油联合顺铂组、顺铂组和莪术油组三组的抑制率两两比较均有差别，也就是说两药联合的作用远远大于单独应用任何一种药物。结论：l、莪术油对人卵巢上皮性恶性肿瘤SKOV3细胞的增殖有明显的

8、抑制作用，其抑制作用呈浓度一时间依赖性，第二个24d'时的增殖抑制作用最明显，莪术油的半数抑制浓度为IC50为34ug／ml。2、莪术油可将人卵巢上皮性恶性肿瘤SKOV3细胞阻滞于GO／G1期。3、莪术油可以增}JEITC(紫杉醇／卡铂)化疗对人卵巢上皮性恶性肿瘤SKOV3细胞的抑制作用。4、莪术油联合TC(紫杉醇／