氯化镧对人卵巢癌顺铂耐药细胞skov3ddp的耐药逆转作用及其机制探讨

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523312224南昌大学硕士研究生学位论文氯化镧对人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的耐药逆转作用及其机制探讨Anexplorationonthedrug-resistantreverseeffectsandrelatedmechanismoflanthanumchlorideagainstthecisplatin-resistantcellsSKOV3/DDPinhumanovariancancer周梦妮培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导老师姓名、职称:刘丝荪主任医师申请学位的学科门类：临床医学学科专业名

2、称：妇产科学论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：评阅人：2015年6月一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有

3、关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按―章程‖规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日氯化镧对人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的耐药逆转作用及其机制探论文

4、题目讨姓名周梦妮学号416523312224论文级别博士□硕士□√院/系/所研究生院医学部专业妇产科学E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为―保密‖，年月后公开）I摘要摘要目的：体外培养人卵巢癌细胞SKOV3，诱导筛选出顺铂耐药细胞SKOV3/DDP。研究稀土氯化镧对人卵巢癌DDP耐药细胞是否有逆转作用，并初步探讨其相关机制。方法：1、以低浓度DDP逐渐递增，诱导卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP，倒置显微镜下观察两株细胞形态学的差别，用CCK8法测定DDP（1、2、4、6、8、16、32μg/ml）对SKOV3细胞及SKOV3/DDP细

5、胞的生长抑制率，分别得出IC50，计算得到耐药细胞的耐药指数。2、CCK8法检测以一定浓度梯度氯化镧作用36、48h后对SKOV3/DDP细胞的增殖活力影响，并选取生长抑制率小于5%浓度为相对无细胞毒性氯化镧浓度；CCK8法检测无细胞毒性浓度的氯化镧与DDP（1、2、4、6、8、16、32μg/ml）联用对SKOV3/DDP细胞的生长抑制率，比较联合用药与单用DDP作用的IC50。3、实验设四组：空白对照组、单独氯化镧10μg/ml组、单独DDP5μg/ml组、氯化镧10μg/ml+DDP5μg/ml组。用克隆形成实验检测不同实验组SKOV3/DDP细胞的

6、克隆形成能力，以流式细胞术检测不同实验组SKOV3/DDP细胞凋亡率。Westernblot检测不同实验组SKOV3/DDP细胞内Caspase-3、ERCC1蛋白的表达水平。结果：1、成功诱导SKOV3耐DDP细胞，其能够在1μg/mlDDP中生长良好。SKOV3/DDP细胞较SKOV3细胞生长缓慢。倒置显微镜下观察SKOV3细胞株形态呈鹅卵石样，大小一致，形态规则；SKOV3/DDP细胞株呈长形梭形，相对扁平，多角，折光性稍差。2、SKOV3/DDP细胞相对SKOV3细胞具有一定耐药性，耐药指数RI为2.09倍。不同浓度DDP处理SKOV3细胞和SKO

7、V3/DDP细胞24h，DDP对SKOV3的IC50为4.96μg/ml，对SKOV3/DDP细胞的IC50为10.37μg/ml。II摘要3、氯化镧（10~320μg/ml）能抑制SKOV3/DDP细胞的体外增殖，10μg/ml氯化镧对SKOV3/DDP生长抑制率小于5%，无直接细胞毒作用，以10μg/ml氯化镧作为后续研究耐药逆转的浓度；氯化镧浓度(≤10μg/ml)时随着时间增加抑制率上升不显著，差异无统计学意义。在较高浓度氯化镧作用时，呈现一定的浓度和时间依赖性。4、10μg/ml氯化镧和DDP联合作用可增强DDP对SKOV3/DDP细胞的细胞毒作

8、用。10μg/ml氯化镧联合不同浓度的DDP作用24h，DDP对S