奥曲肽逆转人耐顺铂卵巢癌细胞耐药性及其机制研究.pdf

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1、中国实用妇科与产科杂志2012年7月第28卷第7期·533·论著文章编号：1005—2216(2012)07—0533—03奥曲肽逆转人耐顺铂卵巢癌细胞耐药性及其机制研究史悦华，沈杨，张云霞，耿丽琴，任慕兰摘要：目的观察奥曲肽(octreotide，OCT)逆转人耐顺铂卵巢癌细胞SKOV3／DDP耐药性的作用，并探讨其机制。方法2009年7月至2010年1月于东南大学医学院中心实验室进行本实验。MTY法及流式细胞术观察顺铂、奥曲肽联合作用后人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3／DDP增殖与凋亡的变化。实时荧光定量PCR检测奥曲肽对SK—OV3／DDP细胞生长抑素受体一2(somatostat

2、inreceptor-2，SSTR2)、多药耐药基因一1(multipledrugresistance一1，MDR1)、多药耐药相关蛋白-2(multidrugresistancerelatedprotein-2，MRP2)mRNA表达的影响。结果奥曲肽与顺铂有协同抗卵巢癌耐顺铂细胞增殖的效应，奥曲肽在质量浓度2．5～20mg／L能显著降低顺铂的IC50(P<0．05)，提高细胞的凋亡率(P<0．05)。SKOV3／DDP细胞有SSTR2mRNA表达，但奥曲肽对SSTR2mRNA表达的调节作用不明显，奥曲肽显著降低SKOV3／DDP细胞MRP2mRNA的表达(P<0．05)，作用呈剂量

3、依赖性，但对MDR1mRNA的表达没有影响。结论奥曲肽可以与卵巢癌细胞表面SSTR2结合，发挥抗增殖、促凋亡等作用，并可能通过降低卵巢癌细胞MRP2的表达逆转顺铂耐药性。关键词：奥曲肽；生长抑素；上皮性卵巢癌；耐药逆转Keywords：octreotide；somatostatin；epithelialovariancancer；durgresistancereversal中图分类号：R737．31文献标志码：A肿瘤耐药是卵巢癌治疗有效率低的重要原因。因此，5．0、10．0、20．0mg／L，顺铂质量浓度为1．0、2．0、4．0、8．0迫切需要新型有效的化疗方案。在发现生长抑素(som

4、a—mg／L，两种药物上述各个质量浓度分别联合，同时设空白tostatin，SST)及其类似物(somatostatinanalogue，SSTA)具有对照组(加等体积不含药物培养液)，每组设3个平行孔，广泛抑制细胞增生及对实体瘤生长抑制作用的基础上，近重复3次。48h后终止反应，每孔加入MTF(5g／L，来有研究表明生长抑素及其类似物，如奥曲肽(OCT)，还可201．tL)，继续孵育4h后吸去培养液，每孔加入二甲基亚砜以增强多种耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本实验旨150p．L，振荡10rain，酶标仪测光吸收值(A)，按以下公式在研究生长抑素类似物——奥曲肽对卵巢癌耐顺铂细胞的计

5、算：细胞增殖抑制率=(对照组平均A值一实验组平均生长抑制作用及耐药逆转机制，为临床治疗耐药卵巢癌提A值)／(对照组平均A值一空白对照组平均A值)X供新的治疗途径。100％。采用Excel软件加权线性回归法计算出50％抑制率时的药物浓度即IC50，并计算奥曲肽处理前后顺铂IC501材料与方法的变化，绘制奥曲肽对顺铂IC50的影响曲线。根据文献计1．1材料人卵巢浆液性乳头状囊腺癌耐顺铂细胞系SK—算联合用药指数(combinationdragindex，CDI)，CDI=生存OV3／DDP，购于中国医学科学院细胞库，该细胞系对顺铂表现率(A药+B药)／[生存率(A药)x生存率(B药)]，C

6、DI≤出明显的耐药性。其他材料为：胎牛血清，RPMI1640培养基，1提示A、B两药合用具有协同细胞毒作用。四甲基偶氮哇盐(methylthiazolyltetrazolium，M'I'T)、二甲基亚1．2．2顺铂、奥曲肽单药及联合对SKOV3／DDP细胞凋亡砜(DMSO)，顺铂粉剂(eisplatin，DDP)，使用时新鲜配制，醋酸的影响根据MTI"结果顺铂质量浓度选2．0mg／L，奥曲肽奥曲肽，2～8~C保存，使用时新鲜配制。选10．0mg／L，设对照、单药和联合共四组。加药36h后收1．2方法集细胞，分别按AnnexinV—FITC／PI凋亡试剂盒说明书进行1．2．1顺铂、奥曲肽

7、及两者联合对SKOV3／DDP细胞增殖细胞染色，上流式细胞仪分析。的影响收集对数生长期细胞，1x10个／孔接种于96孔1．2．3实时荧光定量PCR(realtimeRT-PCR)检测奥曲肽培养板，培养24h，贴壁后弃去培养液，加入含不同质量浓作用后SKOV3／DDP细胞生长抑素受体一2(SSTR2)、多药耐药度药物的培养基200p,L，奥曲肽质量浓度为1．25、2．5、基因-1(MDR1)、多药耐药相关蛋白-2(MRP2)mRNA表达的改变不同