艰难梭菌毒素检测及毒素b受体结合区的表达

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1、分类号UDC硕士学位论文密级艰难梭菌毒素检测及毒素B受体结合区的表达DetectionofClostridiumDfficileToxinsandExpressionofToxinBReceptor-BindingDomain作者姓名：刘元元学科专业：临床检验诊断学专业学院(系、所)：中南大学湘雅医院指导教师：刘文恩教授论文答辩日期丝!!：皇．：zz答辩委员会主席中南大学二0一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以

2、标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。、l、～作者签名：．型l型Z之日期：塑兰年』月旦El学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技

3、术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：j牡导师签名毕日期：丝年』月蛰硕士学位论文中文摘要摘要目的：(1)通过对湘雅医院住院病人腹泻患者粪便标本中的艰难梭茵进行筛查和不同时期检出率的比较，了解该院腹泻患者艰难梭菌的感染情况。(2)构建艰难梭菌毒素B受体结合区原核表达载体，诱导目的蛋白表达。方法：(1)收集2009年2月．12月和2011年4月．7月湘雅医院住院患者腹泻病人粪便标本106份，进行厌氧培养和API鉴定，对培养鉴定获得的菌株应

4、用PCR扩增方法进行A、B毒素及二元毒素基因检测，应用酶联荧光免疫法进行毒素A／B检钡4。(2)提取艰难梭菌基因组DNA，PCR扩增艰难梭菌毒素B受体结合区(CDB3)基因片段，构建原核表达载体pGEX4T-CDB3，IPTG诱导目的蛋白表达，采用SDS．PAGE及Westernblot验证蛋白表达情况。结果：(1)106份标本中，厌氧培养阳性率为15．09％(16／106)；培养阳性的菌株PCR扩增A、B毒素基因均为阳性，而二元毒素基因均为阴性；直接毒素A／B检测阳性率为12．26％(13／10

5、6)。2009年和2011年两个时期标本艰难梭菌检出情况的比较，厌氧培养阳性率分别为22．81％(13／57)、6．12％(3／49)，两者差异有统计学意义；PCR毒素检测阳性率分别为22．81％(13／57)、6．12％(3／49)，两者差异有统计学意义；毒素A／B检出率分别为17．54％(10／57)、6．12％(3／49)，差异无统计学意义。分析阳性患者临床资料发现，他们住院期间用过本课题受中南大学研究生创新课题(201lssxt206)及湖南省卫生厅科研基金课题(2011-008)资助，I

6、硕士学位论文中文摘要头孢类、喹诺酮类、碳青霉烯类、广谱青霉素、克林霉素等其中的一种或多种抗生素。(2)经PCR、酶切及基因测序验证，原核表达载体pGEX．4T-1．CDB3构建成功，诱导表达后获得97KD左右的目的蛋白。结论：(1)我院艰难梭菌相关性腹泻比较严重，抗生素的使用是诱使艰难梭菌感染的重要因素。(2)成功构建原核表达载体pGEX．4T-1．CDB3，且目的蛋白获得大量表达。关键词：艰难梭菌，腹泻，毒素A／B，原核表达载体硕士学位论文英文摘要ABSTRACTObjective：(1)Toi

7、nvestigateclostridiumdifficileinfectionofpatientswithdiarrheainXiangyahospitalbyscreeningclostridiumdifficileinstoolspecimensandcomparingdetectionrateindifferertperiods．(2)ToconstructaprokaryoticexpresstionvectorofClostridiumdifficiletoxinBreceptor—bi

8、ndingdomainandinduceexpressionofthetargetprotein．Methods：(1)106stoolspecimensofhospitalizedpatientswithdiarrheaduringFebruarytoDecemberin2009andduringApriltoJulyin201werecollected，culturedinanaerobicenvironmentandidentifiedbyAPI．Thosepositivec