不同浓度同种异体富血小板血浆提取液对脂肪干细胞体外生长状况的影响

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1、南昌大学硕士学位论文不同浓度同种异体富血小板血浆提取液对脂肪干细胞体外生长状况的影响姓名：韩超申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：刘丽忠201206摘要目的：观察不同浓度的同种异体富血小板血浆(Platelet．richplasma，PRP)提取液对脂肪干细胞(Adipose．derivedstemcells，ADSCs)体外生长状况的影响，为将同种异体PRP提取液应用于创面修复提供实验依据。方法：取SD大鼠腹股沟脂肪组织进行原代、传代培养；通过将获得的细胞向脂肪、骨和神经方向诱导分化，鉴定其干细胞特性；三次离

2、心法制备PRP提取液，并加入DMEM／F12配制体积分数分别为6．67％、3．35％、1．67％的培养液；将第3代ADSCs分为4组：A、B、C组分别以含体积分数为6．67％、3．35％、1．67％PRP提取液的培养液干预ADSCs生长，D组(对照组)ADSCs用含10％胎牛血清的完全培养基培养；A、B、C、D四组细胞分别培养24h、48h后观察ADSCs生长状态，并用MTT法测定细胞增殖活性(OD值)。用SPSSl7．0统计软件分析数据。结果：原代培养获得贴壁生长细胞，呈成纤维细胞样，并成功向脂肪细胞、骨细胞和神

3、经细胞方向诱导分化，即具有多向分化潜能，证明所培养的细胞为ADSCs；PRP中血小板浓度为309．26x1010／L，全血中的血小板浓度为621．05×109／L，PIU中血小板浓度约为全血的5倍；MTT法测定OD值显示：A、B、C、D组在培养24h后OD值分别为0．4343+0．0843、0．35164-0．0766、0．2581+0．0600、0．25924-0．0736，在培养48h后OD值分别为1．01684-0．4436、0．7417+0．1097、0．3678+0．0342、0．3957a：0．1062

4、，A组和B组OD值高于C组或D组，A组OD值高于B组，组间比较差异有统计学意义(P<0．05)，但C组OD值和D组相比较差异无统计学意义(P>0．05)。结论：通过胶原酶消化、原代培养的方法可获得大量ADSCs；适当浓度的同种异体PRP提取液可显著促进ADSCs体外增殖，有望将同种异体PRP提取液应用于创面修复。关键词：富血小板血浆脂肪干细胞同种异体IIABSTRACTobjective：Toexploretheeffectofvariousconcentrationsofallogenicplatelet—ric

5、hplasma(PRP)extractingsolutiononadipose-derivedstemcells(ADSCs)invitro．InordertoprovideanexperimentalevidenceforwoundhealingbyallogenicPRPextractingsolution．Methods：TheadiposetissuederivedfromSDratswereisolated．culturedandpassaged；Cellsharvestedabovewerecultur

6、edrespectivelyinadipose-，osteo-andneuro-lineagesintrducingculturesolution．OilredOstainforadipose—induction，VonKossastainforosteo·-inductionandspecificimmunofluorescencestainforneuro--inductionwereperformedtoidentifythedifferentiationofthesecells．Therats’bloodw

7、ereextractedandpreparedbythreetimes’centrifugationformakingPRPanddifferentconcentrationsofPRP(6．67％，3．35％，and1．67％volumefractions)werepreparedbyDMEM／F12．111ethirdpassageofADSCsweredividedinto4groups：theADSCswereculturedwit}l6．67％volumefractionsofPRPingroupA．wi

8、th3．35％volumefractionsofPI心ingoupB，and砸t111．67％volumefractionsofPRPingoupC，andwith10％fetalbovineserumincompletemediumingroupD．Theeffectsofthefourgroupsontheproliferativeactivitieso