富血小板纤维蛋白与富血小板血浆对脂肪干细胞增殖分化的研究

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1、分类号：R782密级：⑧∥单位代码：10422学号：200913738菇办季硕士学位论文(专业学位)论文题目：富血小板纤维蛋白与富血小板血浆对脂肪干细胞增殖分化的研究TheStudyofPlatelet-richFibrinandPlatelet-richPlasmaforTheProliferationandDifferentiationofADSCSInVitro作者姓名扬壁蕉合作导师2012年4月26日原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已

2、经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：二轻山址Et期：3型蔓工上L关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：盔匕越导师签名：j薹丝翌生Et期：4毡L出山东大学硕十学位论文富血小

3、板纤维蛋白与富血小板血浆对脂肪干细胞增殖分化的影响专业口腔颌面外科学研究生杨世茂导师王明国副教授中文摘要背景和目的：富血小板血浆(Platelet-richPlasma，PRP)是经过梯度离心之后获得的血小板浓缩物，其富含多种生长因子，如转化生长因子(transforminggrowthfactor-B1，TGF-B1)、血小板源性生长因子AB(plateletderivedgrowthfactor—AB，PDGF—AB)、血管内皮生长因子(vascularendothelisgrowthfactor，VEGF)、胰岛素样生长因子(insulin-iike

4、growthfactor，IGF)等。PRP作为第一代血小板浓缩物被用于临床研究中以促进骨的再生。但关于PRP的真是效应确存有争议。有些研究认为PRP并没有明显促进骨质再生的作用。PRP释放生长因子的速度很快，往往在细胞从周围组织中长入之前就已经释放了大量生长因子n3。有研究表明凝血酶可能对集体的细胞有毒性作用瞳1。富血小板纤维蛋白(Platelet-richfibrin，PRF)被认为是第二代血小板浓缩物。PRF制备过程中无需添加凝血酶，其中具有纤维蛋白支架并能保护生长因子不受蛋白酶的分解。与PRP不同，PRF在使用后短时问内不会被吸收。它类似于天然血凝

5、块，由于固态的纤维蛋白的存在，PRF在塑型改建过程中逐渐被吸收破坏。PRF中主要含有三种浓缩的生长因子(TGF—B1、PDGF—AB和VEGF)，这些生长因子能够持续释放至少一周的时间。此外，PRF不仅是～种血小板浓缩物，而且能够刺激机体防御机制发挥其免疫特性。这主要是由于PRF的纤维蛋白网内有大量的白细胞，这些白细胞可以发挥重要的炎症调节作用。这些信息提示我们PRF与PRP之间可能通过不同的方式来释放因子并产生作用。本研究的目的是比较富血小板纤维蛋白与富血小板血浆在体外释放生长因子的含量及其对脂肪干细胞(Adiposetissue—derivedstem

6、cellS，ADSCs)增殖山东人学硕士学位论文分化的影响。材料和方法：1．PRF与PRP体外释放生长因子的比较抽取兔耳中央动脉血，一次离心法制备PRF，二次离心法制备PRP。分别将其置于5ml新鲜的Q—MEM培养液中，37。C静置。分别于l，7，14，21，28天时收集PRF与PRP析出液，使用ELISA试剂盒分别检测PRP与PRF析出液中转化生长因子一B1(transforminggrowthfactor一131，TGF—B1)及血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor—AB，PDGF—AB)的含量。2．PRF与PRP

7、对ADSCs增殖分化影响的比较无菌切除兔腹股沟处的脂肪组织，采用酶消化法原代培养兔ADSCs，多向诱导分化法鉴定ADSCs，取第三代细胞用于实验。将PRP与PRF析出液分别配制成10％培养液，并设置阳性对照组和阴性对照组，分别培养ADSCs，血球计数法计算细胞增殖情况。同时将PRP与PRF析出液配制成含量为10％的成骨诱导液，并设置阳性对照组和阴性对照组，对ADSCs进行成骨诱导，碱性磷酸酶试剂盒检测各组碱性磷酸酶表达情况。结果：1．PRF与PRP体外释放生长因子的比较在PRF析出液中，TGF—B1含量在第14d最高(P

8、7天最高(P<0．05)；PRP析出液中，TGF-B1与PDGF-