不同方法制备富血小板纤维蛋白对脂肪干细胞体外增殖影响的实验研究

《不同方法制备富血小板纤维蛋白对脂肪干细胞体外增殖影响的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：密级：UDC：学号：416523212148南昌大学专业学位研究生学位论文不同方法制备富血小板纤维蛋白对脂肪干细胞体外增殖影响的实验研究Theexperimentalstudyofdifferentmethodsofplatelet-richfibrinextractingsolutiononadipose-derivedstemcellinvitro何赤东培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导老师姓名、职称：刘丽忠教授申请学位的学科门类：临床医学学科专业名称：外科学（整形）论文答辩时间：2015年6月1日答辩

2、委员会主席：评阅人：2015年06月学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论

3、文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mai

4、l备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I接要摘要目的：旨在通过不同离心速度及离心时间制备富血小板纤维蛋白(platelet-richfibrin，PRF)，比较其内所含生长因子特别是血小板衍生生长因子-AB（Platelet-derivedgrowthfactor，PDGF-AB）和转化生长因子-β1（Transforminggrowthfactor-beta1，TGF-β1）含量及其对脂肪来源干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)体外增殖的情况，为将制备出优良的P

5、RF应用于软组织创面修复提供实验依据。方法：取新西兰大耳白兔腹股沟部脂肪组织，使用胶原酶消化法处理脂肪组织，培养原代脂肪干细胞，观察细胞形态及变化，通过血球计数板于倒置显微镜下计数并绘制细胞生长曲线图，收集第3代细胞进行体外三系诱导分化，在诱导7天、14天、28天时间里，分别加入成脂诱导液培养基后行油红O染色、成骨诱导液培养基后行VonKossa染色、成神经诱导液培养基后行免疫细胞荧光检测，鉴定ADSCs多向分化潜能；取新西兰大耳白兔自体静脉血，分别以不同速度（2700r/min、3000r/min、3300r/min）、不

6、同时间（10min、15min、20min）离心制备PRF，通过ELISA试剂盒对每个PRF在静置7天、14天、21天时间里，释放液中TGF-β1和PDGF含量进行检测，观察各组生长因子的浓度差异；CCK-8比色法检测不同方法制备的PRF对ADSCs细胞体外增殖活性的影响。结果：原代培养脂肪干细胞呈成纤维细胞样贴壁生长，具有很强的增殖能力，并成功向成神经元细胞、骨组织细胞和脂肪细胞诱导分化，即具有干细胞特性，因而所培养的细胞为脂肪来源干细胞（ADSCs）。同一静置时间下，以2700r/min，15min组制备的PRF释放PD

7、GF-AB、TGF-β1的含量显著高于10min组及20min组；以3000r/min，10min组制备的PRF释放PDGF-AB、TGF-β1的含量显著高于15min组及20min组；且2700r/min，15min组制备的PRF释放PDGF-AB、TGF-β1的含量显著高于3000r/min，10min组(P﹤0.05)；以3300r/min组的离心速度下，不同离心时间制备的PRF释放PDGF-AB、TGF-β1的含量无统计学意义(P﹥0.05)。CCK-8比色法检测2700r/min，15min组制备的PRF对ADSC

8、s增殖的OD值高于3000r/min及3300r/min组(P<0.05)。II接要结论：来源于动物脂肪吸收物通过胶原酶消化、分离、原代培养的方法可获得大量的具有干细胞特性的ADSCs；通过精确的方法制备PRF更能促进脂肪干细胞体外增殖，有望将制备优良的PRF应用于皮肤软组织缺损创面修复。