不同浓度rhepo对神经干细胞体外培养增殖的影响

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1、不同浓度rhEPO对神经干细胞体外培养增殖的影响：胡萌，吕刚，梅晰凡，张世民【摘要】目的观察不同浓度rhEPO对神经干细胞体外培养增殖的影响，探讨rhEPO联合神经干细胞移植治疗脊髓损伤修复的影响。方法用不同浓度(5、50、500U/mL)rhEPO干预从新生SD大鼠(出生24h以内)取材来的神经干细胞，分别检测每组神经干细胞克隆形成率;在不同时间分别用MTT法检测细胞增殖率;神经干细胞分化的免疫细胞化学染色及计数。结果添加rhEPO各实验组细胞增殖较快最终神经球的数量多于对照组,以50U/mLrhEPO组作用显著;添加rhEPO各实验组的细胞生长曲线均高于对照

2、组,尤其是50U/mLrhEPO组显著高于对照组;NSE和GFAP免疫细胞化学染色和计数结果显示,50U/mLrhEPO组中NSE免疫阳性细胞明显多于对照组(P<0.01)。结论rhEPO对神经干细胞体外培养增殖有促进作用，尤以适中浓度(50U/mL)作用更加明显。【关键词】神经干细胞;rhEPO;体外培养;增殖Abstract:ObjectiveToobservetheeffectultipliesinvitroraisetothenervestemcellofdifferentdensityrhEPO,andtodiscusstheinfluenceo

3、frhEPO,associatedcelltransplant,incuringspinalcorddamagerepair.MethodsThepresentresearchfirstlyintervenedthenervestemcell,obtainedfromtheneouse(bornL).Then,adistinctiveexaminationoftherateofcloneformationineachgroupsnervestemcellsethodinethecellreproducibilityindifferenttimesandnerv

4、estemcelldifferentiationsimmunocytochemistrydyeingandcounting.ResultsThecellmultiplicationinexperimentalgroupsarkablein50U/mLEPOgroup.Thecellgroentalgroupsarkablein50U/mLEPOgroup.TheNSEandGFAPimmunocytochemistrydyeingandthecountingresultsshomunitymasculinecellsinthe50U/mLEPOgroupore

5、thanthatinthecontrolgroup(P<0.01).ConclusionsrhEPOhasthepositiveeffectonthenervestemcellinvitroraisemultiplication,oreobviousoderatedensity(50U/mL).　　Keycell;rhEPO;invitroraise;multiplication　　神经干细胞(nervestemcell,NSCs)是一种具有复制能力和多向分化潜能的原始细胞，在中枢神经系统损伤的修复研究中逐渐引起医学界的关注。近年来的研究发现，神经干细胞不

6、仅存在于胚胎脑组织,而且已发育成熟的内也存在神经干细胞[1]。正常情况下这些NSCs处于“静止”或“休眠”状态，在特定因素的作用下，例如损伤或刺激，其分裂、分化的潜能就被激活，从而出现增殖现象。碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroega公司)、胰蛋白酶、谷氨酰胺(Sigma)，MTT(噻唑兰)、DMSO(二甲基亚砜)，及其他相关试剂。　　1.2方法　　1.2.1神经干细胞的原代培养　　①新生SD大鼠经75%酒精消毒，无菌条件下将前脑完整取出，借助显微镜在视交叉平面和海马平面各做一道冠状切口，留取自视交叉至海马约2mm厚的脑块。将留取的脑块

7、冠状面朝上放置，然后在侧脑室外侧做两道矢状切口，并且在胼胝体上方做一水平切口，留取中间围绕侧脑室前角的脑块。此部位包含侧脑室前角室下带(subventricularzone，SVZ)，富含神经干细胞。②去除软脑膜和脉络丛组织。将脑组织转移到另一培养皿，用剪刀反复剪切至约1mm3大小组织块，加入DMEM/F12基础培养基2～3mL,用吸管反复吹打，制成细胞悬液。③将细胞悬液用200目铜网过滤，去除残留未分散组织，将滤液移入无菌10mL离心管。离心机将过滤的细胞悬液以1000r/min离心10min，以便收集细胞。④吸管小心吸除上清液体，将沉淀的细胞重悬于2mL含B

8、27和20ng/mLbF