不同浓度bme对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化的影响论文

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时间:2018-11-22

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1、不同浓度BME对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化的影响论文【关键词】神经干细胞Effectofβmercaptoethanolonproliferationanddifferentiationofneuralstemcellsfromembryonicrats【Abstraet】AIM:ToexploretheeffectsofdifferentconcentrationsofβMercaptoethanol(BME)inDFI2containing10mL/Lfetalco(FCS)ontheprolifer

2、ationanddifferentiationofneuralstemcellsfromratembryonicspinalcord.METHODS:Econtaining10mL/LFCStoinduceNSCsinvitro,observedthecellsinthreephases,identifiedthedifferentiationusingimmunocytochemistrybyGFAPandNSE24hlater,andanalyzedtheresults.RESULTS:Proliferat

3、ionmol/Lorlmmol/L)andFCSoronlybyFCS.ThedifferentiationrateofNSCstoneuronsinducedbyBME(0.5mmol/L)mol/L)significantlyincreasedto58%.ThedifferentiationrateofastrocytesinducedbyBME(0.5mmol/Lorlmmol/L)andFCSoronlybyFCSecelltoxicity.TheeffectofBMEbineduchbettertha

4、nthatofusingonlyBMEorFCS.【keyercaptoethanol(BME);neuralstemcells;celldifferantiation【摘要】目的:观察含10ml/L血清的不同浓度的β一巯基乙醇(BME)对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化的影响.方法:从大鼠胚胎脊髓中分离神经干细胞,经过2~3次传代培养后,采用含10ml/L血清的不同浓度的BME分组对细胞进行体外诱导,选择3个时段观察细胞形态变化情况,诱导24h后采用GFAP和NSE免疫荧光染色法鉴定分化结果,同时对分化结果进

5、行统计学分析.结果:用BME(0.5mmol/L)组和对照组血清诱导的神经元的百分率分别为49%和10%,而BME(1mmol/L)组的神经元分化率显著升高至58%.由BME(0.5mmol/L)组、BME(1mmol/L)组和对照组血清诱导的星形胶质细胞分化率分别为46%,35%和83%.结论:BME有明显诱导神经干细胞向成熟神经元分化的作用.配合血清使用可使细胞向神经原分化的趋势明显优于单纯使用血清.freelereaptoethanol,BME)又名2巯基乙醇,是具有硫醇臭味的无色或微黄色透明液体,作为一

6、种化学原料药具有抗氧化作用.SCs)向神经元方向分化的过程中起到关键作用,陈霞平等[2]对BME诱导MSCs作用也有相关报道.MSCs在被诱导分化为成熟神经细胞的过程中必定经过神经干细胞阶段.因此,本研究将成功诱导MSCs的BME配合血清作用于神经干细胞,以观察其对神经干细胞增殖过程及分化结果的影响.1材料和方法1.1材料受孕SD大鼠(E10E12)由第四军医大学实验动物中心提供;DMEM/F12,N2添加剂均购自Gibco公司;EGF,bFGF购自Sigma公司,兔抗鼠NSE,GFAP,.freela公司.倒

7、置相差光学显微镜OLYMPUSIX70型.1.2方法1.2.1NSC原代培养依照EM/F12为基本培养基,N2添加剂以1∶100稀释,EGF,bFGF[5,6]终浓度为20μg/L.调整细胞密度约为9×105个/L后接种于培养瓶内,置于37℃,50ml/LCO2孵箱中培养.每隔2~3d更换新鲜培养液,5~6d传代.1.2.2实验分组将盖玻片放入24孔板,并用多聚赖氨酸包备37℃过夜,使用前用PBS冲洗干净.将传至第3代的神经干细胞克隆球用滴管吹打成单细胞悬液,仅使用基本培养基而不加入EGF,bFGF和N2,并稀

8、释至7.5×106个/L,接种到24孔板,每孔lmL细胞悬液.每6孔为一组,共分三个试验组(A~C组)和一个对照组(D组).A~C组分别使BME终浓度达到0.5,1和2mmol/L,并分别加入l/100体积浓度的胎牛血清,而D组仅加入1/100体积浓度的胎牛血清.1.2.3免疫细胞化学检测各组细胞于诱导24h后吸干液体,40g/L多聚甲醛(10mmol/LPBS配置)室温固定30min

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