火针干预脊髓损伤大鼠后血清对神经干细胞增殖分化的影响.pdf

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1、2013年1月第3O卷第1期天津中医药Jan．2013，Vo1．30No．1TianjinJournalofTraditionalChineseMedicineDOI：10．11656／j．issn．1672-1519．2013．O1．09十灸与推拿·火针干预脊髓损伤大鼠后血清对神经干细胞增殖分化的影响李岩，周震，程素利3焦召华3陈爽(1．天津市公安医院，天津300042；2．天津中医药大学第二附属医院，天津300150；3．天津中医药大学，天津300193)摘要：旧的】研究离体状态下火针干预脊髓损伤大鼠后提取血清对神经干细胞增殖分

2、化的影响。[方法】将15只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及火针组，相应干预3d后取各组大鼠血清。从孕14天昆明小鼠胚胎脊髓组织中分离培养神经干细胞，同时采用上述各组血清进行培养，7d后观察各组神经干细胞增殖与分化情况。【结果】神经干细胞在各组血清中均能存活、增殖并可向神经元分化，火针组神经干细胞增殖数目显著多于假手术组及模型组，且火针组神经元分化比例高于其余两组(P

3、码：A文章编号：1672—1519(2013)01—0025—03脊髓损伤(SCI)是交通事故、工矿事故及自然硬膜囊，撞击能量为25mmxl0g，损伤直径为2．5mm。灾害中常见的、严重危害人类健康的疾病，患者多与脊髓接触的撞杆底端呈弧状凹陷，直径2．5mill，出现损伤平面以下的感觉、运动障碍及尿便功能异与脊髓表面相吻合。撞击成功的标志为大鼠尾巴痉常【】1。目前，国内外对于SCI的治疗研究多集中在具挛性摆动，双下肢及身体回缩样扑动，双下肢呈弛有自我更新和定向分化潜能的神经干细胞(NSCs)缓性瘫痪。假手术组只做T9一TIO椎板切除

4、术。术后上[21。笔者在临床应用火针多年，发现其对慢性SCI小心护理饲养，每天挤压排尿3次，直到反射性膀疗效显著。前期研究也发现，火针对于脊髓神经细胱排空建立。胞具有保护和抗凋亡作用。但火针是否可能通过1．3干预方法火针组选取大鼠脊髓损伤部位上影响NSCs的增殖及分化产生作用尚不清楚。本课下端的棘突间隙，相当于T7、T8及T11、T12部位，题应用细胞离体培养和血清药理学的方法，就火针各旁开0．5cm，共4个穴，8个针刺点，采用快针法干预SCI大鼠后血清对脊髓NSCs增殖分化的影响火针针刺，每穴仅刺1针，深度为3～5mm。造模后即进

5、行相关研究。行针刺1次，之后每隔24h针刺1次，共治疗3次。1材料与方法1．4目标血清制备SD大鼠采血前禁食12h，于1．1实验动物1)孕14d昆明小鼠2只，清洁级。第三次针刺后麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，分离2)健康sD大鼠l5只，体质量250～300g，由北京维血清。56℃灭活30rain，220Dm滤膜滤过除菌，-20℃通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：保存备用。SCXK(京)2007—0001，随机分为假手术组、模型组1．5神经干细胞的分离、培养及鉴定取孕14d与火针组，每组5只。昆明小鼠，无菌取出胎鼠，经D—Ha

6、nks液反复冲洗，1．2SCI模型动物建立采用改良的Allen’S法[61解剖镜下剥离皮肤、肌肉等组织，眼科剪剪碎脊髓，建立急性SCI动物模型。即采用20g／L戊巴比妥钠0．25％胰蛋白酶消化，吸管吹打，200目铜网过滤，离(40mg／kg体质量)腹腔注射将大鼠麻醉，取后正中心，弃上清，加入含有DMEM／F12、2％的B27、20n儿切口，切除T9棘突、部分T10棘突和部分椎板，暴碱性成纤维生长因子(bFGF)、20ng／mL、表皮细胞露硬膜，10g的铁锤从25mm高处自由落下，撞击生长因子(EGF)、100U／mL青霉素、100t

7、~g／mL链霉素的生长培养基，以5xl0~'／mL密度接种入25cm2培作者简介：李岩(1970一)，男，博士，主任医师，硕士研究生导师，长期从事火针、刺络的临床及实验研究，现为中国针灸养瓶中，置人37oc、5％CO饱和湿度培养箱中培学会刺络与拔罐专业委员会常委、天津针灸学会理事。养。此后每3d半量换液1次，每7d左右传代1次。2013年1月第3O卷第1期天津中医药Jan．2013，Vo1．30No．1TianjinJoumalofTraditionalChineseMedicine27统计学意义，表明火针干预后的SCI大鼠血清可促

8、[5]李岩，程素利，周震，等．火针对大鼠脊髓损伤后运动功能及BDNF表达的影响2012，29(6)：545—547．进NSCs增殖并可诱导其向神经元分化，这为火针[6】KhanT，HaveyRM，SayersST，eta1．Anima