比较富血小板纤维蛋白(prf)与富血小板血浆(prp)体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞(adscs)增殖和成骨分化的影响

《比较富血小板纤维蛋白(prf)与富血小板血浆(prp)体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞(adscs)增殖和成骨分化的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、比较富血小板纤维蛋白(PRF)与富血小板血浆(PRP)体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的影响[]目的比较富血小板纤维蛋白（PRF）与富血小板血浆（PRP）体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞（ADSCs）增殖和成骨分化的影响。方法抽取兔耳中央动脉血，一次离心法制备PRF，二次离心法制备PRP，　　分别将其置于5mL新鲜的α-MEM培养液中，分别于37℃下静置1、7、14、21、28d，收集PRF与PRP析出液，检测析出液中转化生长因子-β1（TGF-β1）及血小板源性生长因子

2、-AB（PDGF-AB）的质量浓度。将收集的PRF与PRP析出液配置成条件培养液培养ADSCs，观察其对ADSCs增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。结果1）生长因子释放情况：不同时间点的PRF析出液中，14d时TGF-β1的质量浓度达到最高，7d时PDGF-AB的质量浓度最高；不同时间点的PRP析出液中，1d时TGF-β1与PDGF-AB的质量浓度即达最高，以后逐渐下降。2）对ADSCs增殖及ALP活性的影响：PRF析出液中，14d时对其影响最大；PRP析出液中，1d时对其影响最大。结论与PRP相比，PRF能够缓慢

3、持久地释放生长因子，更有力地刺激ADSCs的增殖和分化。　　[关键词]富血小板纤维蛋白；富血小板血浆；脂肪干细胞；成骨分化　　[]R783[文献标志码]A[doi]10.3969/j.issn.1000-1182.2012.06.019　　口腔种植技术已经广泛用于缺失牙及牙列的修复中，种植体与骨之间如何能达到稳定的骨结合一直是研究的热点。从人血液中提取的富血小板血浆　　（platelet-richplasma，PRP）富含多种生长因子，可以促进组织再生[1]。目前有许多学者将其用于口腔　　种植研究中，但效果差异较大。富

4、血小板纤维蛋白（platelet-richfibrin，PRF）是一种区别于传统PRP技术的富含细胞因子和生长因子的新一代血小板浓缩物，于2001年由Choukroun等[2]提取出来，因此又称　　为Choukroun’sPRF。PRF的分子结构类似于天然血凝块，可以借助细胞因子的调节作用以及纤维蛋白的支架作用进行组织修复[3]。与PRP比较，PRF制备时无需添加任何生物制剂，同时还具有促进成骨及炎症调节的能力，能够独立应用以修复小范围的骨缺损，也可以与骨移植材料联合应用进行大范围骨缺损的修复。但是目前对PRF和PRP

5、释放细胞因子的情况，以及对靶细胞作用效果的差异的研究还较少，本研究主要对不同时间点提取的PRF和PRP析出液中生长因子的质量浓度进行测定，并探讨二者对脂肪干细胞（adiposetissue-derivedstemcell，ADSCs）增殖分化的影响，以便为临床及组织工程研究选择合适的支架材料提供参考。　　1材料和方法　　1.1主要试剂　　高糖α-MEM培养液、胎牛血清（fetalbovinese-rum，FBS）、青霉素、链霉素、胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶（Gibco公司，美国），碱性磷酸酶（alkalinephospha-

6、　　tase，ALP）试剂盒（南京建成生物工程研究所）、血小板源性生长因子-AB（plateletderivedgroelinked　　immunosorbentassay，ELISA）试剂盒、转化生长因　　子-β1（transforminggroin，然后加入等体积的含10%FBS的α-MEM培养液终止消化。200目滤X过滤后1000r·min-1离心5min，倾去上层残余脂肪以及上清液，用含10%FBS的α-MEM培养液重悬细胞，接种在培养瓶中，置于37℃含5%CO2的培养箱中静置培养，24h后细胞贴壁，换液，以后

7、每3天换液1次。每日用倒置相差显微镜观察细胞的生长形态，待细胞长满80%时，0.5g·L-1胰蛋白酶消化，1∶3传代培养，取第3代细胞用于实验。　　1.3ADSCs的鉴定　　采用多向诱导分化（成脂和成骨诱导）的方法鉴　　定ADSCs。　　成脂诱导方法如下。细胞长满培养瓶底后，常规消化并收集细胞，将细胞以每毫升2.1×104个细胞的密度接种于6孔板中，置于细胞培养箱中培养，常规换液。当细胞完全融合后弃培养液，更换成脂诱导液a（含α-MEM培养液、青霉素、链霉素、1μmol·L-1地塞米松、0.5mmol·L-13-异丁基

8、-1-甲基黄嘌呤、200μmol·L-1吲哚美锌[]目的比较富血小板纤维蛋白（PRF）与富血小板血浆（PRP）体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞（ADSCs）增殖和成骨分化的影响。方法抽取兔耳中央动脉血，一次离心法制备PRF，二次离心法制备PRP，　　分别将其置于5mL新鲜的α-MEM培养液中，分别于37℃下静置1、7、1