星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究

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1、复旦大学硕士学位论文星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化的生物学研究Thebiologicalresearchofastrocytesfromprimarycultureandneuralstemcellsinduced作者姓名：滕腾学科专业:临床医学硕士（儿外科)导师：李昊教授导师组成员：陈莲副教授陆国平副教授复旦大学硕1:研究生学位论文星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究目录缩略语注释4中文摘要5英文摘要7前9材料与方法11號2026錢30参考文献3134mm……4i3复旦大学硕Jr研究生学位论文星形胶质

2、细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究缩略语注释英文缩写英文词汇中文词汇ASTastrocyte星形胶质细胞GFAPGlialfibrillaryacidicprotein胶质纤维酸性蛋白CNSCentralnervoussystem中枢神经系统bFGFBasicfibroblastgrowthfactor碱性成纤维细胞生长RT-PCRreversetranscriptasepolymerasechainreaction逆转录-聚合酶链反应Real-imePCRReal-timepolymerasechainreaction实时聚合酶链反应CNTFCili

3、aryneurotrophicfactor睫状神经生长因子EGFEpithelialgrowthfactor表皮生长因子NSCNeuralstemcell神经干细胞DAPI4',6-diamidino-2-phenylindole4,6_联脒-2_苯基n引噪FBSfetalbovineserum胎牛血清PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液VEGFVascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子bFGFBasicfibroblastgrowthfactor碱性成纤维生长因子NPCNeuralprec

4、ursorcell神经前体细胞MMPMatrixMetalloproteinase基质金属蛋白酶TLR4Toll-likereceptor4Toll样受体44复旦大学硕士研究生学位论文星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究中文摘要目的星形胶质细胞是中枢神经系统数量最多的胶质细胞并且在中枢的许多功能中发挥重要作用，星形胶质细胞体外获得有原代培养星形胶质细胞和神经干细胞诱导分化的星形胶质细胞两种方法，然而两种方法得到的星形胶质细胞其生物学特性是否等同有待于进一步研究。本研究通过细胞生长、划伤反应及检测细胞功能及致癌性等

5、，直接验证原代培养星形胶质细胞与神经干细胞诱导分化的星形胶质细胞生物学是否等同。方法通过诱导原代培养的新生大鼠海马神经干细胞分化为星形胶质细胞，经典方法分离大脑皮层得到星形胶质细胞，并运用差速贴壁和恒温摇床振荡的方法对两者进行纯化，采用间接免疫荧光方法检测其纯度。将两种细胞进行细胞生长、细胞划伤反应进行比较。并且采用荧光定量PCR、Western-blot检测细胞内蛋白分子对两者生物学性质进行对比。应用SPSS17.0统计软件进行分析，所有计量资料以均数标准差(歹±s)表示，两组组间比较采用独立样本的t检验，P<0.05认为有统计学意义。结果原代培养及神经干细胞诱导分化两种方法，经培养

6、都可以得到星形胶质细胞。经间接细胞免疫荧光实验证实，神经干细胞诱导分化为星形胶质细胞方法培养与纯化得到的星形胶质细胞的纯度可以达到99.4±0.5%，而传统方法培养得到的星形胶质细胞纯度为94.2±2%，两种方法培养的星形胶质细胞的形态，生长趋势和对损伤的反应方面无明显差异。采用Western-blot检测细胞内EGFR和P53蛋白的表达，及荧光定量PCR测定GFAP的表达，两种细胞其表达量基本一致无统计学差异。小结神经干细胞诱导分化为星形胶质细胞的培养与纯化可以得到纯净的星形胶质细胞，两种方法培养的细胞在细胞生长、划伤反应、功能鉴定及致癌性等方面无明显差异，并且神经干细胞诱导分化方法

7、具有易制备易纯化的特点，因此可作为制备星形胶质细胞的常规方法。为各种体外星形胶质细胞试验提供细胞基础。关键词神经干细胞；诱导分化；星形胶质细胞；纯化；GFAP;EGFR；P53蛋5复旦大学硕上研究生学位论文星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究白中图分类号R7266复旦大学硕土研究生学位论文星形胶质细胞原代培养与神经干细胞诱导分化生物学研究Thebiologicalresearchofastrocytesfromprimarycul