次声刺激诱导原代培养大鼠星形胶质细胞释放谷氨酸的研究.pdf

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1、中l田庙复区学骠矗2014~V，第29卷，第6期·基础研究·次声刺激诱导原代培养大鼠星形胶质细胞释放谷氨酸的研究江山徐成峰李娅娜谢红萍袁华王会会李玲摘要目的：观察16Hz，130dB次声刺激对原代培养的大鼠星形胶质细胞谷氨酸释放的影响，并探讨其释放机制。方法：原代培养大鼠海马区星形胶质细胞，将其分为次声刺激组(IEgroup，n=6)，Gap26+次声刺激组(Gap26+IEgroup)，对照组(Ctrlgroup，n=6)。次声刺激组细胞暴露于次声舱中，分别给予15min，30min，60min，9

2、0min，120min和240min的次声刺激；对于Gap26+IE组，则在次声刺激前，选用Cx43半通道阻断剂Gap26预处理星形胶质细胞；对照组也置于次声舱，但不给予次声刺激。次声刺激频率为16Hz，强度为130dB。为了排除Gap26对谷氨酸释放的影响，还选用乱序Gap26肽段(ScrbGap26)来预处理星形胶质细胞(ScrbGap26+IEgroup，n=6)。采用免疫荧光染色测定细胞Cx43的表达情况，采用高效液相色谱(HPLc)来测定细胞外液谷氨酸浓度。结果：次声刺激后，IE组细胞外液谷

3、氨酸的浓度显著升高，并在刺激90min后，细胞外液谷氨酸浓度达峰值，为(4．6士0．3)nmol／ml，显著高于对照组(2．3+0．2)nmol／ml(P<0．05)，这说明次声刺激可以显著增高星形胶质细胞外液的谷氨酸含量。此外，次声刺激后，IE组细胞Cx43的表达也显著升高，刺激60mins时，Cx43平均荧光强度达到峰值，为(198~33)(AUC)，显著高于对照组(_

4、0．17)nmo~ml，显著低于次声刺激组(尸<0．05)。结论：次声刺激可以诱导星形胶质细胞释放谷氨酸；Cx43半通道阻断剂Gap26抑制了谷氨酸释放，次声刺激诱导的谷氨酸释放可能是通过Cx43半通道来完成的。关键词次声；星形胶质细胞；谷氨酸；Cx43半通道中图分类号：R493，R454．1文献标识码：A文章编号：1001．1242(2014)．06．0499．05Infrasoundinducedglutamatereleasebyculturedastrocytesofrats／JIANGSha

5、n，XUChengfeng，LIYa-na，etalChineseJournalofRehabilitationMedicine，2014，29(6)：499-503Abstractobjective：Todetecttheefectofinfrasoundontheglutamatereleasebyculturedastrocytesofratsandthepos—siblereleaseroutes．Method：Culturedhippocampalastrocytesweredividedi

6、ntothreegroups：controlgroup(Ctrlgroup)，infrasoundexposuregroup(IEgroup)andGap26+IEgroup．TheastrocytesintheIEgroupwereplacedintotheinfrason-icchamberandexposedtoinfrasound(16Hz，130dB)fordiferentdurations(15min，30min，60min，90min，120min，240min)，whileCtrlgr

7、oupwasputintothesameinfrasonicchamberbutwithoutinfrasonicexposure．Furthermore，inordertoidentifytheglutamatereleaserouteunderinfrasound，astrocyteswerepre—treatedwithCx43hemichannelblockerGap26beforeinfrasoundexposure．Inaddition，scrambledGap26peptide(Scrb

8、Gap26)wasusedtoruleouttheefectoftheGap26itselfontheglutamate，whichwasregardedastheScrbGap26+IEgroup．Afterinfrasoundexposure，immunocytochemistrymethodwasusedtodetecttheexpressionofCx43．Atthesametime，highpressureliquidchromatograph