资源描述：
《视神经星形胶质细胞原代培养技术研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、228ACTAACADEMIAEMEDICINAESUZHOU2001;21(2)方法与技术视神经星形胶质细胞原代培养技术研究卜曙阳黄强周丽英孙立军孙志方(苏州大学附属第二医院,苏州215004)摘要:目的介绍一种快速原代培养、分离、纯化视神经星形胶质细胞的方法。方法对P2期小鼠的视神经进行组织块原代培养,振荡法分离纯化,形态学观察,免疫组织化学染色。结果培养的星形细胞纯度高,GFAP染色显示98%阳性。结论组织块原代培养,振荡法分离纯化视神经的星形胶质细胞,对细胞的损伤小、纯度高,是快速得到该细胞
2、的理想途径。关键词:视神经;培养;细胞;小鼠中图分类号:Q343.6文献标识码:A文章编号:1000-5749(2001)02-0228-03ConditionedPrimaryCultureofAstrocyteinRatOpticNerveBUShu-yang,HUANGQiang,ZHOULi-ying,etal(TheSecondHospitalAffiliatedtoSuzhouUniversity,Suzhou215004,China)Abstract:ObjectiveTointroduceame
3、thodforconditionprimarycultureofastrocyteofopticnerve.MethodsConditionedmediumwasmadeofGGF-BF,andastrocyteofopticnervewasculturedandpurifiedbyshaking.Identificationwasmadebymeansofmicroscopeobservationandimmunohistochemistry.ResultsAstrocyteofratopticnervewas
4、culturedandpurified,whichshowedpositivereactiontoglialfibrillaryacidicprotein(GFAP).ConclusionConditionedprimarycultureofratopticnerve,purifiedthroughshaking,isareliableandquickmethod.Keywords:opticnerve;culture;cell;rat视神经胶质细胞包括星形胶质细胞和少突胶质(GGF-BF,GIBCO)20g/m
5、l组成。细胞两种类型,起源、分化不同,功能各异。近年来1.2视神经胶质细胞的来源、培养Balb/c新生小国外一些研究表明:1-型星形胶质细胞能促进O-鼠由本院脑肿瘤研究室提供,产后2天(P2),雌雄不2A祖细胞向2-型星形胶质细胞和少突胶质细胞限,75%酒精浸泡2min后立即移进超净台,在4!分化,而且未成熟星形胶质细胞能促进损伤后的视10额带式显微镜下开眶取出眶内段的视神经,置于神经再生。本实验采用小鼠眶内段的视神经进行条无菌培养皿中,剔除血管,0.01mol/LPBS洗涤3件化原代培养,振荡法分离、纯化,纯化细胞
6、进行形遍,用显微组织剪剪至小块状,加入培养基,接种于态学观察、免疫组化鉴定,为进一步研究星形胶质细塑料培养瓶中,置37∀、5%CO2培养箱中培养。[1~3]胞的功能奠定基础。1.3分离、纯化培养4天后第1次换液,7天后扩瓶,置37∀、5%CO2培养箱24h后吸出培养液,1材料与方法完全培养基冲洗3遍,冲去漂浮细胞,加入新鲜条件1.1条件化培养基的制备每100ml的条件化培化培养基,移至37∀、5%CO2培养箱孵育2h,然后养基是由DMEM80ml(definedmodifieddulbeccos拧紧瓶盖,固定在
7、恒温振荡器(THZ-C型,太仓市medium,DMEM,GIBCO,美国),20%的胎牛血清光明实验分析仪器厂)上,摇动15~18h(37∀、20ml(fetalbovineserum,FBS,GIBCO),牛垂体素250r/min),此时培养细胞分成漂浮细胞和贴壁细胞收稿日期:2000-09-08作者简介:卜曙阳(1967-),女(汉族),江苏靖江人,主治医师,讲师,医学硕士,主要从事视神经损伤的研究苏州医学院学报2001;21(2)229两种,移去漂浮细胞,培养基冲洗5遍,胰酶消化,消流水终止反应,苏木素复染10s
8、观察结构。用0.01化后的细胞离心(80r/min,37∀,5min),取沉淀物mol/LPBS代替作阴性对照,正常新生小鼠脑的星42加入培养基重新悬浮按10!/cm接种于培养瓶中形细胞作阳性对照。培养,每3天换液1次,1周后以1#2方式传代,第42结果代以后培养瓶中置入载玻片,待其表面生长足量细[2,4,5]胞时
