原浆型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的

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1、原浆型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的【】目的将神经干细胞(nsc)与原浆型星形胶质细胞(pas)以不同比例进行体外共培养，观察nsc的定向分化的差异，筛选出有利于向神经元分化的最佳方案，为体内实验提供依据。方法根据nsc与pas的比例进行分组：3:1组;2:1组;1:1组;1:2组，共培养10天后，采用免疫组化法对分化神经元进行dapi荧光标记，在显微镜下随机选取20个视野，每次计数100个细胞，计算神经元在nsc中所占的比例，并进行统计学处理。结果nsc：pas2：1组分化得到的神经元数量最多，与分化的胶质细胞比例为65%:35%;而1：1组、3：1组稍低一些，比例分别为61%:39%

2、和59%:41%;1:2组比例最低为57%:43%。结论在离体细胞共培养的实验中，因细胞的比例不同，nsc分化亦存在差异，其中nsc:pas为2:1时，nsc分化为神经元的比例最高。【关键词】星形胶质细胞;神经干细胞;分化;比例aselectionofoptimizedratiooftheprotoplasmicandfibrousastrocytestothedirectionaldifferentiationofneuralstemcelllimin,zegnlin,liuyuan,etal.(statekeylaboratoryoftrauma,burnsandbinedinjury,d

3、epartment3,instituteofsurgeryresearch,dapinghospital,thirdmilitarymedicaluniversity,chongqing400042,china)abstract:objectivethroughculturingnscaximumamountsofneuronscandifferentiatefromnsc.methodsbycoculturingofnscmunohistochemistyly.thedatanscintheratioof2:1(65%)uchmorethanthatintheothergroups.the

4、groupsof1:1and3:1(61%and59%)aybemoreadvantageousfornscindifferentiatingintoneurons.keycell;differentiation;ratio本室在实验中观察到原浆型星型胶质细胞(protoplasmicastrocyte，pas)与纤维型星型胶质细胞(fibrousastrocyte，fas)相比更有利于神经干细胞(neuralstemcell，nsc)向神经元的分化[1]。.133229.但不同比例条件下nsc向神经元分化的情况可能存在差异，为此本实验将nsc与pas以不同比例进行体外共培养，观察nsc的定向

5、分化的差异，筛选出有利于向神经元分化的最佳方案，为体内实验提供依据。材料与方法1实验动物孕13～14天的大鼠和新生2天的大鼠。2试剂与材料10%胎牛血清(fbs，hyclone)，2mmol/ll谷氨酰胺(sigma)，0.6%葡萄糖，dmem/f12培养基(hyclone)，多聚赖氨酸，0.25%胰蛋白酶(sigma)，10mmol/llleucinemethylester(sigma)，0.15mmol/ledta，hanks液(自备)，兔抗大鼠igg(gfap,sigma)，小鼠抗大鼠igg(nf200,sigma)，羊抗小鼠tritc(igg荧光控制体，北京中山公司)，0.4

6、%tritonx100，甲醇，30%h2o2，0.01mpbs(北京中山公司)。3实验方法3.1pas的培养新生2天的sd大鼠，无菌条件下剔除软脑膜及血管，取大脑皮层组织，剪碎，0.25%胰蛋白酶37℃消化30分钟，培养液(10%胎牛血清，2mmol/ll谷氨酰胺，0.6%葡萄糖，dmem)吹打成细胞悬液，接种于培养瓶，孵育30分钟，翻转瓶子吸出细胞悬液，接种于涂有多聚赖氨酸的培养瓶中，密度为1×106个/ml，孵箱中培养，每3～5天换液1次。培养至14天后，向培养基中加入10mmol/llleucinemethylester并孵育1小时以杀死小胶质细胞，用新鲜培养基洗2次，孵育2小

7、时，37℃摇床上以180r/min振荡16小时，o2a前体细胞被摇起，瓶中所剩的一层即为pas。3.2pas的鉴定固定pas细胞，用0.5%h2o2/甲醇灭活内源性过氧化物酶，0.4%tritonx100孵育，滴加正常山羊血清封闭，加入gfap抗体37℃孵育2小时，羊抗小鼠tritc荧光抗体igg显色后dpx封片，激光共聚焦显微镜观察，激发波长为543nm，呈红色。3.3nsc的培养和鉴定参