柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(etmic1)的克隆表达与功能初步-研究

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1、‘致谢本研究是在导师仝宗喜副教授、孙铭飞博士的悉心指导下．完成的。从论文的选题、设计直至写作无不倾注着导师的心血和汗水。研究生学习期间，仝宗喜副教授在学习和生活上给予了指导、关怀和帮助，iF是老师的淳谆教诲，指引我积极进取、不断耳义得堪'少iP。老师渊博的学识，儒雅的学者风范，i卜学￡卜深深钦佩和崇拜。孙铭飞博士是我在广东省农科院兽医研究所寄生生物研究室进行毕业论文研究期间的指导老师。老师严谨的治学态度、强烈的责任感和敬业精神，为学生树立了工作和学习的典范。时光飞逝，研究生学习转眼就要结束了，正是在两位老师的教导和人格魅力的影响F，我无沦从号业知以、技能还是人文素质E都有了质的提

2、高。在此衷心感谢两位恩师!感谢河南农、Ik大学E新f【_{=老师、贺秀媛老师，邓立新老师，jil队!心士。平老师等的指导，感谢他们在学习道路L给我指明方向。感谢广东省农科院兽医研究所寄生生物研究室的廖申权老师、戚南I』J老师、吕敏娜老师，吴彩燕老师等在实验及，I三活二I：作t{1给予了极大的帮助和支持。感谢河南农、№人学刘伟、冯婧玉、李小佳、二fi朝阳、曹桂彬、慕春龙、谷素美、郭玲玲等给予的帮助，感谢f乍南农业大学盂祥龙、陈佳和林栩慧，云南农业火学鄢远会等给弘的帮助。真诚地感谢我的父母亲，感鲥他们一直以来对我的理解和支持及二：十多年来刈‘我的无私的爱。感谢我的哥姐，感谢他们·贯以

3、来列‘我的支持。最后，再次对』开有关一iL、、帮助和支持我的同学、朋友们表示衷，IL、的感谢。因为有你们，我的

4、f予更快乐多姿!引言I．3．2重2H基冈』：f￥疫苗⋯⋯⋯⋯⋯．．1．3．3DNA疫崖i⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．1⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯．二)⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯j．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4⋯．．．⋯．⋯．．⋯．．)1·3·4重组活凶类疫苗⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．82鸡球虫感染的免疫府答⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．82．I鸡肠相天淋巴}『l织⋯⋯⋯⋯．．2．I．1肠L皮』百J细胞(IECs)2．I．2肠L

5、皮问淋巴细胞(IELs)2．I．3亡J然杀伤(NK)细胞2．1．4『州彳r层淋巴细J胞(LPLs)2·1·5派何’尔氏结(PPs)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102·1·6盲肠扁桃体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112·1·7其它细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．2GALT对鸡球虫感染的免疫麻答⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112·2·1球虫抗原的加I：和递节⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112,2·2抗体介导的免疫反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2．3抗球虫免疫中lgA的作川2．3细胞介导的免疫反应⋯⋯

6、⋯⋯⋯．2．3．IT细胞的免疫效应⋯⋯⋯．2．3．2细胞闪J，3MIC蛋白研究进展⋯⋯24I广J7i第一部分柔嫩艾美耳球虫微线蛋白I的克隆表达、纯化1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一181．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．1．1试验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯1．1．2试验川虫株⋯⋯⋯⋯．．18181．1．3【密株、载体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．1．4分子生物学试剂和试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l芍1．1．5常规化学试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18I．I．6主要仪器⋯⋯I．I

7、．7培养基及配制1819I．1．8兜隆MICI基冈(RT．PCR)所J}=l引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·191．1．9CaCl2法转化JL}j材料⋯⋯⋯1．2．0琼月旨糖凝胶电泳所需材料1．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1．2．1MICl的克隆⋯⋯⋯⋯⋯．191919191．2．2M1CI、MIC1．ADRg；,驻fH表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·222结果与分析252．1RNA的纯度及浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··252．2MICl的RT．PCR±．I果2．3M1C1利MICl．AD的PCR扩增结果2．4重组质粒酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、．25262．5MICI．AD／MICl,gffl质粒住人肠杆凶的诱导表达和纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272．6重组蛋白的浓度3结论与讨论⋯⋯⋯⋯⋯第一：部分柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1免疫保护试验1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1．I试验材料⋯⋯⋯1．1．1试验动物1．1．2试验虫株2830I．1．3主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯301．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1．2．1免疫动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯