柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白的初步研究

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1、密级:论文编号:中囯农业科学院学位论文柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白的初步研究nfVThePreliminaryResearchonTwoConservedProteinsofEimeriatenella.方、界、V、I'霞，:寧硕士研宄生2翟颀指导教师：韩红玉副研宄员申请学位类别：农学硕士专业：葡贈医学研宄方向：〜、、-h'‘■培养单位：上海兽医研宂所研宄生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成

2、果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名：时间：>/女年^月午日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即.•中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签名时间：如八年6月午曰导师签名:时间：年&月>曰中国农业科学院

3、硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白的初步研究动物寄生虫论文作者翟颀专业预防兽医学研究方向及其分子生物学指导教师韩红玉培养单位（研究所、中心）.st^t姓名职称单位专业hr、泰M盲评//评1>j：>■✓阅盲评////人盲评////答辩程训佳教授复旦大学预防兽医学主席朱建国教授上海交通大学预防兽医学林矫矫研究员上海兽医研究所预防兽医学答傅志强研究员上海兽医研究所预防兽医学辩金亚美研究员上海兽医研究所预防兽医学tvil委员会议记录（秘书）顾惠明论文答辩时间地点2015年5月27日，上海兽医研究所。密级:论文

4、编号:中国农业科学院学位论文柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白的初步研究ThePreliminaryResearchonTwoConservedProteinsofEimeriatenella硕士研究生：翟颀指导教师：韩红玉副研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物寄生虫及其分子生物学培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationThePreliminaryResearchonTwoConservedProtei

5、nsofEimeriatenellaM.S.Candidate：QiZhaiSupervisor：AssociateProf.HongyuHanMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:AnimalParasitesandMolecularBiologyMay2015摘要鸡球虫病在世界范围内严重影响养鸡业的健康发展，给养鸡业造成巨大的经济损失，该病主要是由艾美耳属球虫寄生于鸡肠道引起。在7种艾美耳球虫中，柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella）是分布最广、致病力最强的球虫之一，它寄生在盲

6、肠的黏膜下，引起出血性肠炎，可导致鸡死亡。鸡球虫属于顶复器门原虫，顶复器门原虫是一类专一性的细胞内寄生虫，这类寄生虫尽管入侵的宿主细胞各不相同，但它们都有一个共同保守的入侵机制，当虫体黏附宿主细胞后，在虫体顶端与宿主细胞膜表面形成一个紧密的运动接触环（MovingJunction，MJ），这一特殊结构在虫体入侵宿主细胞过程中发挥至关重要的作用。研究发现由微线体分泌的顶体膜抗原1（Apicalmembranceprotein-1，AMA1）是组成MJ的关键分子，因此，与AMA1相互作用的分子可能参与形成MJ，并在虫体入侵宿主细胞过程中必不可

7、少。为了弄清楚柔嫩艾美耳球虫AMA1的相互作用分子以及在虫体入侵过程中发挥的作用，本实验室前期利用酵母双杂交技术，以柔嫩艾美耳球虫顶体膜抗原1（EtAMA1）为诱饵，筛选了柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库，获得一些可能与EtAMA1相互作用蛋白的ESTs序列。本研究选取其中编号为559和39的两个EST序列，对其进行克隆、表达和功能初步分析，并对其与EtAMA1的相互作用关系进行了验证。1.柔嫩艾美耳球虫CHP559和CHP39基因的克隆及生物信息学分析选取的两个EST序列均含有3’末端的Ploy（A）尾，利用5’RACE技术获

8、得了这两个基因含完整开放阅读框的全长cDNA序列，编号559与39基因的ORF分别与柔嫩艾美耳球虫保守的假想蛋白（hypotheticalprotein，conserved）ETH_00024