毒害艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫鸡胚传代研究

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1、新疆农业大学硕士学位论文毒害艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫鸡胚传代研究姓名：樊玉娟申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：黄兵;岳城20090401毒害艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫鸡胚传代研究摘要鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠道所引起的一种危害严重的全球性寄生虫病，每年给养鸡业造成巨大的经济损失。球虫体外培养模型的建立对深入研究球虫学及球虫病学具有重要的意义和作用，包括：诊断、抗原抗体产生、评估寄生虫免疫模型的性能、药物筛选、改进生化疗法、。临床分离株的鉴别分类、疫苗生产、寻找致弱虫株，以及提供研究寄生虫与宿主相互作用的活虫体等，并为基因工程疫苗的研制奠定基础。本研究首

2、先利用传统生物学方法对实验所选的毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)虫株进行鉴定。进行了毒害艾美耳球虫鸡胚传代条件的研究，探索柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)鸡胚培养条件及建立柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株。收集纯化毒害艾美耳球虫及柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，通过接种不同日龄鸡胚、不同剂量、添加营养素等试验来探索球虫鸡胚培养的最适环境，结果证明，9曰龄组为毒害艾美耳球虫最佳接种日龄，平均卵囊产量(每只胚卵囊数)为2．0×104个卵囊，成熟率为82．4％，而柔嫩艾美耳球虫最佳接种日龄为lO日龄；接种量均为0．1x104个子孢子组的平均卵囊产量为O．03×

3、103，成熟率约为O，证明此剂量难以使鸡胚获得感染；且lX104个子孢子剂量组，成熟率高达99％，为最佳接种剂量；胰岛素和叶酸均有促进卵囊在鸡胚中发育的作用，且胰岛素最佳添加量为1000U／mL，叶酸的最佳接种量为O．05mg／mL；对比柔嫩艾美耳球虫接种SPF鸡胚与普通鸡胚卵囊产量，结果表明无明显差异，普通鸡胚平均卵囊产量略高于SPF鸡胚。利用以上探索条件成功地构建了毒害艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫鸡胚培养体系、建立柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株，并对鸡体传代株和鸡胚适应株进行生物学特性比较，得出鸡胚适应株具有保持良好免疫原性和致病性降低的优点。对柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株进行

4、内生性发育史研究，成功地观察到了三代无性生殖和两代有性生殖的全部发育阶段。本研究成功探索了毒害艾美耳球虫鸡胚传代的条件，成功构建了柔嫩艾美耳球虫鸡胚培养模型，建立了一株柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株。对柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株进行了内生性发育史研究，并对柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株和鸡体传代株进行生物学特性比较。研究结果为鸡球虫体外培养及基因工程疫苗的研制筛选奠定了基础。关键词：毒害艾美耳球虫；柔嫩艾美耳球虫；鸡胚；传代；内生性发育史ResearchofEimerianecatrixandSubculturedinAvianEmbryoAbstractAviancoccidios

5、isisthemajorparasiticdiseaseofpoultryinfectedbyEimeriaspp．Itinflictssevereeconomiclossesonthepoultryindustry．Thein—depthstudyofinvitromodelplacedagreatimportanceroleofthecoccidiaandcoccidiosisstudies，include：diagnosis，antigenantibodytoevaluatetheperformanceofparasiteimmunemodel，drugscree

6、ning，improvedchemicalandbiologicaltherapies，theidentificationofclinicalisolatesofclassification，vaccineproduction，lookingfortheweakstrain，asweilasresearchtheinteractionbetweenparasitesandhosts，suchasthelivingbody,forthegeneticengineeringvaccinefoundation．·Inthisstudy,theuseoftraditionaJb

7、iologicalmethodsfirsttheexperimentalpoisoningofselectedEimerianecatrixstrainsandidentificationofinsects．includingthepotentialperiodofparasiticparts。sporesoftheshortesttime，theshapeofoocysts，oocystsize．SeparationtechniqueusingasingleoocystisolatedpurestrainsandbyPCRidentif