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时间:2019-02-20
《舒郁胶囊对大鼠海马神经元5-ht3受体表达及其介导的ca2+-cam通路的作用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、舒郁胶囊对抑郁情绪模型大鼠海马神经元中5-HT3受体表达及其介导的Ca2+-CaM通路的作用提要目的:观察舒郁胶囊及其君药柴胡的抗抑郁作用,通过离体实验研宄,结合血清药理学实验方法,以大鼠海马神经元中5-HT3受体作为研宄对象,初步探索抑郁情绪发病的微观作用机制,并试图明确调肝方药舒郁胶囊的相应作用靶点。方法:运用无血清培养技术进行大鼠海马神经元原代培养;制备各组大鼠血清,在中药血清药理学的指导下,实验共分为三个部分:1.采用孤养结合慢性温和刺激复制抑郁情绪大鼠模型,以调肝方药舒郁胶囊及其君药柴胡的提取物进行药物干预,氟西汀作为阳性药物对照,
2、制备各组大鼠血清,分别加入体外培养新生大鼠海马神经元的培养基中孵育24h,采用蛋白印迹技术(Westernblot)和细胞免疫焚光技术(Immunofluorescence,IF)分别检测神经元中5-HT3A受体和5-HT3B受体蛋白水平的表达。2.采用与实验一相同的方法制备血清,在此基础上运用荧光探针fluo-3/AM标记细胞内游离钙离子,利用激光共聚焦显微镜观察海马神经元细胞内Ca2+荧光强度的变化及各组海马神经元中CaM受体蛋白水平表达量的变化,进一步研宄舒郁胶囊及其君药柴胡对5-HT3R-Ca2+-CaM通路的影响。3.制备一定浓度的
3、舒郁胶囊和柴胡含药血清,利用激动剂激活5-HT3受体信号通路,将5-HT3受体信号通路中的Ca2+-CaM体系单独作为研宄对象,观察海马神经元细胞内Ca2+荧光强度和CaM受体蛋白水平表达量的变化,探索舒郁胶囊及其君药柴胡对5-HT3受体介导的Ca2+-CaM受体蛋白信号通路的作用。结果:1.Westernblot和免疫荧光细胞化学实验结果显示,与正常组比较,抑郁情绪模型大鼠血清处理的神经元胞内5-HT3A受体和5-HT3B受体蛋白表达量均显著性升高(P<0.05);与模型组比较,用药治疗组血清处理的神经元5-HT3A受体表达量显著性降低(P
4、<0.05),趋向于正常水平,舒郁胶囊治疗组、柴胡治疗组和氟西汀治疗组之间无显著性差异;但5-HT3B受体蛋白的表达量没有显著变化(P〉0.05)。2.实验结果表明,与正常组相比,模型血清组海马神经元内Ca2+浓度明显降低(P<0.05),CaM蛋白表达水平也显著性降低(P<0.05);与模型血清组相比,药物治疗血清组海马神经元细胞内Ca2+浓度较高,CaM蛋白表达水平亦显著性升高(P<0.05),与正常组无明显差异(P>0.05)。3.空白组大鼠海马神经元钙离子平均荧光强度为205.536,添加激动剂孵育15min后,激动剂组神经元细胞内钙
5、离子荧光强度和CaM蛋白水平表达明显降低(P<0.01)。事先给予舒郁胶囊和柴胡含药血清干预24h后,再次添加激动剂孵育,大鼠海马神经元细胞内钙荧光强度与空白组相比无明显变化,较之激动剂组有显著性升高(P<0.05),神经元胞内CaM蛋白表达变化趋势与Ca2+—致。结论:1.抑郁情绪模型大鼠血清处理的大鼠海马神经元细胞内5-HT3A和5-HT3B受体蛋白表达量均显著性升高,证实该受体与抑郁情绪的密切相关性。2.Westernblot和免疫荧光实验结果显示,调肝方药舒郁胶囊及其君药柴胡均可以有效纠正模型大鼠海马神经元中5-HT3A受体蛋白表达异
6、常升高的状态,从而达到治疗抑郁情绪的目的。3.舒郁胶囊不仅能调控5-HT3受体蛋白的表达,还可以显著调节5-HT3受体相关的Ca2+-CaM受体蛋白的含量,其作用方式与5-HT3受体激动剂相反。4.将5-HT3受体信号通路中的Ca2+-CaM体系单独研究发现,5-HT3受体激动剂激活信号通路后,使海马神经元内大量钙离子外流,并降低CaM蛋白表达,舒郁胶囊可调节神经元细胞内Ca2+达到动态平衡并增强CaM蛋白表达,推测舒郁胶囊通过调控海马神经元细胞内Ca2+-CaM体系的变化调节5-HT3受体活性,可能是其治疗抑郁情绪的作用机制之一。关键词抑郁
7、情绪;免疫荧光;蛋白质印迹技术;舒郁胶囊;5-HT3A/3B受体;Ca2+—CaMEffectsofShuYucapsuleontheexpressionof5-HT3receptorandits2_j_?signalpathwayof5-HTR3-Ca-CaMinrathippocampusneuronsSpecialty:PharmacologyofTraditionalChineseMedicineTutor:Hui-yunZhangAuthor:Qing-fangGeAbstractObjective:Ouraimistostudyt
8、heeffectofShuYucapsuleandBupleurumrootwhichistheprincipaldrugofrecipeoncuringdepre
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