胃癌pai-1遗传不稳定性、5’侧翼区甲基化及btg3启动子区甲基化与临床病理特征的相关性研究

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1、浙江大学硕士学位论文胃癌PAI--1遗传不稳定性、5’侧翼区甲基化及BTG3启动子区甲基化与临床病理特征的相关性研究姓名：刘佳申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：李继承20120228浙江大学硕士学位论文中文摘要胃癌以厶j遗传不稳定性、5，侧翼区甲基化及曰丁∞启动子区甲基化与临床病理特征的相关性研究浙江大学医学院硕士研究生导师人体解剖与组织胚胎学刘佳李继承教授中文摘要第一部分胃癌例二J基因遗传不稳定性和5’．侧翼区CpG位点甲基化研究研究背景：我国是胃癌的高发和高死亡率国家。起病隐匿且恶变率高，寻找早期诊断和指导治疗的临床检测指标显得刻不容缓

2、。最新研究发现，胃癌的发生、发展是多基因遗传(genetic)与表观遗传(印igenetic)共同参与的结果。基因遗传研究证明，抑癌基因失活在肿瘤发生发展中起着十分重要的作用。遗传不稳定性能增加突变率，使抑癌基因功能失调。微卫星不稳定性(microsatelliteinS协bili锣，MsI)和杂合性缺失(10ssofhetero巧gos时，LOH)被认为是基因遗传不稳定性的两个主要表型特征；表观遗传调控是可遗传的通过对DNA和组蛋白等的修饰影响基因表达．这种修饰同时会产生表观遗传学标记，其中以DNA甲基化和组蛋白乙酰化最为常见。DNA异常的高甲基化可导致抑癌

3、基因的表达失活。PAI．1可调节组织型纤溶酶原激活物(tPA)和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)的活性。该系统对纤维蛋白和其他细胞外基质蛋白有水解作用。其中基膜的降解，JlI浙江大学硕上学位论文中文摘要可导致肿瘤细胞向正常组织的浸润，与肿瘤转移密切相关．有研究发现肿瘤组织比正常组织有更高的明厶J7基因表达量，认为高水平的PAI．1，是胃癌患者预后不良的指标．但是导致该基因表达异常的分子机制有待进一步研究。研究日的：本实验检测定位于7号染色体长臂的脚二J基因pai．1、D7s47l和D7s515三个位点的基因遗传不稳定性和该基因+10到+129区域cpG岛甲基化

4、水平；阐明它们与胃癌发生、淋巴转移、浆膜浸润、分化程度、TNM分期等临床病理学特性的关系．揭示尿激酶性纤溶酶原激活物抑制因子(PAI．1)与肿瘤发生发展的相关性；探讨尉，．J基因在胃癌组织中异常表达的基因遗传和表观遗传机制，为寻找胃癌早期诊断和指导治疗的临床检测指标提供实验依据．研究方法：(1)苯酚．氯仿抽提法，提取50对冰冻新鲜胃癌组织及相应癌旁组织的基因组DNA。(2)PcR-单链构象多态性(single．S仃锄dConfomationPolyInorpllism，ssCP)、常规银染检测位点的遗传不稳定性．(3)胃癌组织基因组DNA重亚硫酸盐处理，MS．

5、PCR检测+10到+129区域CpG岛甲基化水平。(4)sPSS16．0软件统计分析相关性．研究结果：(1)浸润至粘膜层和肌层的胃癌MsI检出率(未超出浆膜)，高于浸润至浆膜外组织(42．86％慨2．33％，尸=0．031)；MsI发生率在淋巴结转移组(2．56％)，明显低于无淋巴结转移组(2．56％W．18．18％，尸=0．007)；但在低分化组的MSI发生率高于中度和高度分化组(21．05％惯．o．00％，P=o．027)。(2)刚二J基因+lO到+129区域的CpG岛甲基化水平与胃癌临床病理学间无显著的统计学差异。结论：剧．J基因的MsI发生率在胃癌转移

6、抑制的过程中起了重要作用，可作为胃癌恶化及进展的一个指标；但是LOH并未显示相关性，提示遗传不稳定性的两个方面：LOH和MSI可能通过不同的机制调节；剧二J基因+lO到+129区域的cpG岛甲基化水平与胃癌临床病理学关系无统计学意义，可能不是影响胃癌发生与恶性进展的主要因素。关键词：胃癌；MSI；LOH；尉二J基因；DNA甲基化IV浙江大学硕十学位论文中文摘要第二部分金雀宜黄素表观遗传学调控B阳岁基因表达诱导胃癌G2脱期周期阻滞的研究研究背景：表观遗传学调控是指在不改变基因组序列的前提下，通过对DNA和组蛋白的修饰来调控基因表达。国内外已有专家研究表明，异常的

7、DNA甲基化和组蛋白乙酰化是有用的肿瘤诊断分子标记。可以用于肿瘤发生的早期预测，也可用于肿瘤的分级。目前表观遗传学研究主要集中在抑癌基因，其启动子区域的异常高甲基化常常是抑癌基因失活、肿瘤发生的因素。口c棚护口瑚zD∞，^朋船甩P3(B7G3历M乱么尸厦D4)是一个潜在的抑癌基因，在很多恶性肿瘤中呈现低表达。属BTG家族，该家族很多基因具有调节生长和周期的作用。研究者认为一些肿瘤，如乳腺癌、口腔鳞状上皮癌、肾癌、前列腺癌等的发展可能与21号染色体长臂的抑癌基因B弼．3的缺失及启动子区域甲基化异常的共同作用有关．在胃癌病人中，已报道B粥．3在血浆中含量越高，疾病

8、预后越好。而召粥．3基因在胃癌中表观遗