老年人胃癌肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态论文

《老年人胃癌肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、老年人胃癌肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态论文蔡建春，刘棣，张海萍，钟山，夏宁邵【摘要】目的分析老年人胃癌组织及其癌旁小凹上皮和慢性胃炎小凹上皮中肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法，检测51例老年人胃癌及其癌旁小凹上皮和15例慢性胃炎小凹上皮石蜡标本中E钙黏素（ECD）、错配修复酶hMLH1、APC和6氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态。结果在胃癌组织及其癌旁小凹上皮和慢性胃炎小凹上皮中，基因总的甲基化率分别为70.6%（36/51例）、47.0%(24/51例)和6.6％（1/15例），三者之间差别有统计学

2、意义（P＜0.01）。Lauren弥漫型、Ming浸润型、低分化和未分化、Ⅲ期和Ⅳ期、T3和T4以及有淋巴结转移胃癌的甲基化率分别高于Lauren肠型、Ming膨胀型、高和中分化、Ⅰ期和Ⅱ期、T1和T2以及无淋巴结转移胃癌的甲基化率（均P＜0.05）。结论ECD、hMLH1、APC和MGMT基因启动子区甲基化在慢性胃炎小凹上皮中少见.freeleDNA修饰试剂盒(美国加拿大Chemicon公司)；TaqDNA聚合酶(日本TaKaRa公司)；引物由上海英俊生物技术公司合成；B淋巴瘤细胞株Raji和人宫颈癌细胞株Hela引自美国模式菌种收集中心（ATCC）。1.2方法1.2.1DNA提取

3、按胃癌组织、癌旁5cm小凹上皮和慢性胃炎小凹上皮分成3组。在显微镜下进行观察、标记，采用文献3方法取出上述组织，分别放入1.5mL离心管，加入裂解缓冲液200μL(10mmol/LTrisHCl,pH8.0,100mmol/LKCl,2.5mmol/LMgCl26H2O,0.45%Tg/mL），在56℃条件消化12～16h，4℃离心（12000r/min），吸出上清液，移至新的离心管，-20℃保存。1.2.2DNA亚硫酸氢盐修饰取已抽提的DNA(10ng/μL)1.0μg，按照CpGenomeDNA修饰试剂盒的操作步骤进行。1.2.3MSP反应采用套式PCR，总反应体系：DNA2.

4、0μL,正向引物0.2μL，反向引物0.2μL，TaqDNA聚合酶0.2μL，dNTP0.2μL，10×缓冲液2μL，加三蒸水至20μL。每次反应都采用Raji细胞株作为阳性对照，Hela细胞株作为阴性对照。PCR反应条件：预变性5min，95℃30s→30s→72℃30s，35循环，72℃再延伸10min(表1)。1.2.4产物鉴定及结果判定配制3%琼脂糖凝胶，PCR产物用溴酚蓝染色，取产物5～10μL，加样于琼脂糖凝胶加样孔，置于电泳槽中电泳，电泳缓冲液为1×TAE，电压180V。当溴酚蓝条带迁移至琼脂糖凝胶2/3处时终止电泳，紫光灯下观察电表1肿瘤抑制基因启动子区甲基化和非甲基化

5、PCR引物泳条带，凝胶成像仪采集图像。ECD、hMLH1、APC和MGMT基因启动子区甲基化和非甲基化电泳条带大小(bp)分别为167和178，124和118，97和108，81和93。若甲基化引物扩增出现条带，说明该病例发生甲基化，若非甲基化引物扩增出现条带，说明该病例处于非甲基化状态。1.3统计学处理数据处理采用SPSS12.0软件包。采用Fisher精确检验，P＜0.05为差别有统计学意义。2结果2.1肿瘤抑制基因启动子区甲基化状况15例慢性胃炎小凹上皮中，仅1例有1个基因甲基化。癌旁小凹上皮中，有1个基因甲基化和≥2个基因甲基化的病例分别为33.3%（17/51例）、13.7

6、%（7/51例）。胃癌组织中，有1个基因甲基化和2个基因甲基化的病例分别为23.5%（12/51例）、47.1%（24/51例）。胃癌组织总甲基化率（70.6%）明显较癌旁小凹上皮和慢性胃炎小凹上皮甲基化率（47.0%和6.6%）高,三者比较差别有统计学意义（P＜0.01）（图1）。2.2胃癌组织肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态与临床病理参数的关系男性与女性胃癌的甲基化率比较差别无统计学意义（P＞0.05）；而Lauren弥漫型胃癌、Ming浸润型胃癌、分化不良(低分化)胃癌、未分化和印戒细胞胃癌、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌、T3和T4胃癌以及有淋巴结转移胃癌的甲基化率分别高于Lauren肠型胃癌、

7、Ming膨胀型胃癌、分化良好(高、中分化)胃癌、Ⅰ期和Ⅱ期胃癌、T1和T2胃癌以及无淋巴结转移胃癌的甲基化率，二者比较差别有统计学意义（P＜0.05,表2）。N:癌旁小凹上皮;T:胃癌组织;M:用甲基化引物进行MSP扩增;U:用非甲基化引物进行MSP扩增;N和T前面的数字表示病例序号.图1MSP测定胃癌及其癌旁小凹上皮肿瘤抑制基因启动子区甲基化的电泳表2老年人胃癌肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态与临床病理参数的关系表中数据为例数.组内比较,☆:P