探讨胰腺癌syk基因启动子区5’cpg岛甲基化改变的特点与临床特征的关系

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1、探讨胰腺癌Syk基因启动子区5’CpG岛甲基化改变的特点与临床特征的关系王疏疏―I—•(贵阳市护理职业学院贵州贵阳550081)R的：研究与分析胰腺癌Syk基因启动子区?5&rSqU0;CPG岛甲基化改变的临床特点，并探讨其与临床特征间关系。方法：选取64例癌旁正常胰腺组织与64例胰腺癌组织进行研宄，并采用甲基化特异性PCR(MSP)法对Syk基因启动子甲棊化情况进行检测。结果：经检测后，64例癌旁正常胰腺组织屮未检测到Syk基因启动子甲基化；而胰腺癌组织屮，Syk基因启动子甲基化率为43.75%(28/64)；2者比较(P<0.05)。淋巴结转移胰

2、腺癌组织Syk基因启动子甲基化率为66.67%(20/30)明显高于未产生淋巴结转移者23.53%(8/34),2者比较(P<0.05)。然Syk基因启动子甲基化与患者肿瘤人小和组织分化程度及肿瘤位置无关(P>0.05)。结论:Syk基因失活的原因为Syk基因启动子甲基化，同时Syk棊因启动子甲棊化可能会导致胰腺癌发生及发展。因此，临床可通过检测Syk基因启动子甲基化來判断患者病情和预后，为临床诊断及预防及治疗提供重要参考价值。【关键词】Syk棊因；甲棊化；胰腺癌R39A2095-1752(2015)08-0093-03临床上，胰腺癌发展是一个

3、复杂且多阶段的过程，其屮包括癌棊因激活与抑癌基因变异及缺失等。目前研宄胰腺癌时，基因变异则对肿瘤生成及转移较为关注。酪氨酸激酶在胰腺癌信号传导途径屮起着十分关键性的作用。经相关研究表明［1］，胰腺癌抑癌基因酪氨酸激酶Syk的表达缺失与胰腺癌转移存在十分紧密联系。但对于其发生缺失的原因尚未清楚。抑癌基因表达缺失发生的主要原因为抑癌基因启动区CpG岛甲基化。本次研究为研究与分析胰腺癌Syk基因启动子区?5’CpG岛甲基化改变的临床特点，并探讨K与临床特征间关系。特选取癌旁正常胰腺组织与胰腺癌组织进行研宄，并采用甲基化特异性PCR法检测胰腺癌组织中S

4、yk启动子甲基化情况，并进行比较与分析，报道如下。1.资料与方法1.1一般资料选取本院2012年7月〜2014年10月期间经手术切除的64例癌旁正常胰腺组织与64例胰腺癌组织进行研究。正常胰腺标本取自瘤体及距离瘤体5.0cm外。本次研究标本均为手术切除或门诊活检所得新鲜标本。且所奋组织均经病理学检査证实，研究方案经医院伦理委员会批准，患者自愿参与研究i签署知情同意书。术前未采用任何方式对患者进行治疗，患者术后资料完整，精神正常，可配合进行研究。胰腺癌组织中，分化程度：低分化38例、高分化26例；淋巴结转移者为30例、无淋巴结转移者为34例；肿瘤部位：胰头4

5、8例、胰体尾16例；年龄27〜68岁，平均为(46.5±1.0)岁。正常胰腺组织：年龄25〜65岁，平均为(44.0±1.0)岁1.2方法本次研究的新鲜组织在离体后立即放入液氮速冻，并转入到-70°C冰箱中保存备用。试剂：DNA纯化试剂盒(Promega公司)、氢酸和亚硫酸氢钠均购自SIGMA公司。DNA提取：选取新鲜组织100mg于液氮中碾碎，并采用蛋白酶K消化和苯酚-氯仿法进行抽取，同吋采用乙醇沉淀法提取组织中DNA,最后采用TE缓冲液进行稀释、溶解，再采用紫外分光光度计检测DNA浓度及纯度，并放置于-20°C冰箱中保存以备

6、用［2】。DNA的亚硫酸氢盐修饰：取2ugDNA放置于EP管中，然后加入双蒸水进行稀释到50ul,并加入5.5ul新鲜配制的3.0mmol/L氢氧化钠溶液，并摇匀，放置于37°C水浴中恒温12min,再加入10mmol/L对苯二酚30ul、3.6mol/L亚硫酸钠520ul,避光并混匀，待混匀后通过纯化柱［3］。使用WizardDNA纯化冋收系统提纯DNA，加5.5ul新鲜配制的3mmol/L氢氧化钠溶液，于37°C水浴中恒温12min,再加入5mmol/L醋酸铵41ul,再使用无水乙醇沉淀DNA,并加入20ul双蒸水进行溶解，并放置于-20°C冰箱中保存

7、以备用［4】。甲基化特异性引物包含9个CpG岛，上游引物为5’-CGATTTCGCGGGTTTCGTTC-3’，下游引物为5’-AAAACGAACGCAACGCGAAAC-3’,扩增片段为243bp。非甲基化特异性引物包含8个CpG岛，上游引特为5’-ATTTTGTGGGTTTTGTTTGGTG-3’，下游引物为5’-ACTTCCTTAACACACCCAAAC-3’,扩增片段为140bp[5]。MSP反应：PCR反应体系(25ul):10×PCRbu

8、ffer25.0ul2.5mmol/LdNTP混合物4.0ulMg