四种绿藻多糖的提取分离及其结构与抗凝活性研究

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1、中国海洋大学硕士学位论文四种绿藻多糖的提取分离及其结构与抗凝活性研究姓名：冯以明申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：于广利201206四种绿藻多糖的提取分离及其结构与抗凝活性研究摘要本文以刺松藻(Codiumfragile)、雨生红球藻(Haematococcuspluvialis)、盾叶蕨藻(Caulerpapeltata)和--种未鉴定绿藻为原料，采用脱脂后水提取和碱提取的方法，对这4种海藻中的多糖进行了提取分离，共得到15种粗多糖。经高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和高效液相色谱(HPLC)分别对9种可溶性多糖分子量和15种多糖的单糖组成进行了分析。结果表明，9种可溶性粗多糖分

2、子量分布范围均较宽，纯度较低，需进一步分离纯化。15种多糖的单糖组成各异，理化性质分析结果表明，刺松藻水提多糖(CFC和CFH)主要是硫酸阿拉伯半乳聚糖，碱提多糖(CFA)，尤其是浓碱提取多糖(CFS和CFT)中有高含量的甘露糖，推知其主要为甘露聚糖。盾叶厥藻多糖CPC和CPA2主要是木糖与半乳糖聚合物并含少量硫酸基，CPC还含有甘露聚糖；CPH主要含有葡聚糖和半乳聚糖，且糖醛酸含量高；CPA主要含有半乳聚糖。未鉴定绿藻多糖与刺松藻多糖相近，水提多糖主要为阿拉伯半乳聚糖，但硫酸化程度较低，浓碱提取的多糖主要为甘露聚糖。雨生红球藻粗多糖(HPC、HPH和HPA)的单糖组成相近并且复杂，蛋白

3、含量较高，故需进一步纯化处理。将雨生红球藻冷水提多糖HPC用Q—SepharoseFF阴离子交换柱分级纯化，得到纯化多糖组分HPCI—3。运用高效液相色谱法(HPLC)、红外光谱(IR)等方法对其单糖组成、相对分子量和基本结构特征进行分析比较。结果表明，各组分主要含有半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)、葡萄糖醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA)、木糖(XyD、鼠李糖(Rha)、岩藻糖(Fuc)、葡萄糖胺(GlcN)和半乳糖胺(GAIN)，其中，Gal含量最高，大于20％。多糖HPCI．3的相对分子量分另0为502．6ku，373．2ku，577．

4、5ku矛口300．5ku。为了确定刺松藻浓碱提多糖CFS和CFT细微结构，经酸降解获得系列寡糖F1—7和Pl—lO。通过ESI—MS确定了6种甘露寡糖和10种硫酸甘露寡糖的聚合度和硫酸基数目。推知CFS和CFT均主要为甘露聚糖且硫酸化程度较高。对得率较高且硫酸化程度较低的难溶于水的多糖CFS进行特异性氧化和硫酸酯化后，分别得到水溶性良好的OxiCFS和CFSS。通过含量测定，单糖组成分析，红外光谱及核磁共振波谱等比较研究，确定了OxiCFS为B—D一1，4．甘露糖醛酸聚糖，推知CFS为B．D一1，4．甘露聚糖。在结构研究的基础上，以APTT、TT、PT为评价指标，评价了11种绿藻粗多糖和

5、2种经化学修饰的刺松藻碱提多糖抗凝血活性，结果表明，多糖C—H和CFC的抗凝血活性最佳，这与其单糖组成和阴离子强弱程度有关，主要通过抑制内源性凝血途径起到抗凝效果；通过测定u—PA、t-PA、PAl一1，探讨了8种可溶性绿藻多糖对纤溶系统的影响，结果表明，仅有C．C，C．H和C．A2是对u．PA活性有积极影响，但8种多糖均可提高t-PA／PAI一1，即可促进纤溶酶原转化为纤溶酶并导致血栓的溶解，其中以CPH、CPA和C．H的效果最为显著，t-PA／PAI一1值约为空白的2倍，且远高于肝素对照品。最后，将所得的多糖通过还原胺化法对与FITC偶联，这些荧光标记的多糖被制成多糖芯片，为进行多糖

6、与蛋白相互作用研究提供了基础。关键词：绿藻多糖：甘露寡糖；电喷雾离子化质谱；抗凝活性：纤溶活性；糖生物学芯片Extraction，isolation，structuralcharacterizationandanticoagulationofpolysaccharidesfromfourkindsofgreenseaweedsAbstractFourkindsofgreenseaweedsCodiumfragile，HaematococcuspluvialisandCaulerpapeltataandanunidentifiedgreenalga，asstartingmaterial，w

7、erefirstlydelipided，thenextractedwithwaterandalkalinesolution，and15typesofcrudepolysacchafideswereacquiredatlast．Therelativemolecularweight(Mw)andmonosaccharidecompositionweredeterminedwithhighperformancegelpermeationc