四川攀枝花赛葵上双生病毒的检测与鉴定

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1、西南大学硕士学位论文四川攀枝花赛葵上双生病毒的检测与鉴定姓名：于云奇申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：青玲20120531摘要四川攀枝花赛葵上双生病毒的检测与鉴定植物病理学专业硕士研究生于云奇指导教师青玲教授粉虱传双生病毒(W1liteny-仃an锄i仕ed删讥rIls，WTG)是世界上多种经济作物上的重要病原之一，造成的危害和损失严重。近年来在我国海南、广东、福建、云南等地多有wTG侵染的报道，在四川的番茄上也已造成严重的危害。本实验室从四川攀枝花发现了表现黄脉症状的杂草赛葵样品，由于杂草是双生病毒重要的中间寄主和初始侵染源，为明确杂草赛葵

2、样品中双生病毒的种类，我们对这些赛葵样品进行了针对双生病毒的检测，并对病毒的基因组结构及变异进化进行了分析。利用已报道的双生病毒通用引物P舯B，对所有155份赛葵样品进行PcR检测，共有108份样品扩增到了长约500bp的特异片段，阳性率为69．68％，其中仁和区的样品64份，红格镇44份，这表明赛葵样品中存在双生病毒的侵染。扩增到了病毒D1蛆．A的全基因组，序列比对分析表明，赛葵样品中扩增到的双生病毒包括中国番茄黄化曲叶病毒(乃M幻y8肋w跆矿伽刀锄玩口wM，TYLCCNV)及云南赛葵黄脉病毒(胁^懈加‘聊yP砌ww伽阮，z，z口以切伽，MY弋删)两

3、种病毒。通过序列比对及构建系统进化树发现，赛葵样品(SC44、SC95、SCl70、SC21l、SC314、SC344、SC327及SC329)扩增到的My¨小Ⅳ与G朗Ballk中登录的Myn[烈V(AJ971501．2)具有最大的序列相似性(98．4％～99．9％)，亲缘关系最近；样品SC44扩增到的TYLC㈣SC44与TyLC州TbYlO(AJ319675)序列相似性高达99．1％，而从样品SC327中扩增到的TYlCCNv．SC327与，ⅣLC唧TbSCl01(Ⅲ082233．1)的序列同源性高达99．5％。利用双生病毒卫星DNAp分子的通用引物

4、p01／B02，从89份样品中扩增到了长约1300bp的条带，阳性率为57．42％，其中仁和区的样品有54份，红格镇35份。经鉴定样品中存在两类卫星DNAB分子，分别是伴随Myn仆Ⅳ的卫星MY、厂YNB和伴随MrW的卫星Mm。利用双生西南大学硕士学位论文病毒卫星DNAn分子及DNA．B组份的特异性引物在所有样品中均未检测到目的条带。对赛葵样品中病毒及卫星DNAp分子复合侵染的检测表明，用双生病毒特异性引物检测这些样品，有104份样品检测到了MY、憎矾，，有70份检测到了TYLCCNv，同时检测到这两种病毒的样品共有70份，所占比例为45．16％，表明田

5、间赛葵样品中双生病毒复合侵染现象普遍。有19份样品同时检测到两种病毒My价仆Ⅳ和TYLCCNV及伴随两种卫星MY弋啪和MY、忸，占比例为12．26％，仅有1份样品为两种卫星M”啪和MYvB分子共同伴随M¨删但未伴随TYLCCNV；未发现MY弋厂Ⅵ旧和MY弋厂B这两种卫星分子仅仅伴随TYLCCNv的现象。关键词：四川；赛葵；中国番茄黄化曲叶病毒；云南赛葵黄脉病毒；DNAp；鉴定ⅡAbs仃act’MolecularidentificationofBegomoVirusesisolatedf．rom胁加以s咖跖刀zcD加刀z仃刀比历矗刀Ⅳ刀linPanzhi

6、hua，SichuanProVinceCandidate：YuⅥmqiSupervisor：Prof．QillgLillgAbstractWhitefly-仃舡瑚njtted蹦njDiVirusesmG)，known鹊oneof也emostilnpon如tpatllogenformosteconomiccrops，havec孤sed伊eatdamageand10ssest0锄pprodllctionaroundⅡ圮wodd．Inrecentyears，manypro、，inces锄dre舀onsinChi啮su(m嬲Hailm，G岫ngd伽眵刑ian，

7、MmnaIl’etc．，kwemany)，ield10ssr印ortsaboutWTGs．111thisrese砌，讹^雠触mcD加舢万如玩咒“ms锄pleSShow吨yellowVeins)，I】1pt01瑚werecollected劬mfieldsinP锄吐illm，SichuanproVince．W∞ds肌ch嬲^纪^铘触m∞，．D刀缎蒯毒Z励以。册，afeconsideredt0benleinteImediatehosts(betw嘲缸sects锄dcrops)锄dinitialsourcesofiIlfeCtion．M01e∞lardetec

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