黄酮类化合物cjy对β-淀粉样蛋白25-35介导的pc12细胞损伤的保护作用及其机制研究

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1、河南大学硕士学位论文黄酮类化合物CJY对β--淀粉样蛋白25--35介导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究姓名：樊茹申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：姬汴生201204摘要目的：探讨黄酮类化合物(flavanoid，CJY)对D．淀粉样蛋白25．35(beta．amyloidprotein25．35，AD25．35)诱导的PCI2细胞(大鼠嗜铬细胞瘤细胞，pheochromocytomacell)氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法：应用不同浓度的H202(100，300，500，700，1000uM)对PCI2细胞进行损伤，通过倒置显微镜观察细胞的形态，MTT法测定PCI2细胞

2、的损伤率，确定出引起细胞损伤的最佳损伤浓度和最佳损伤时间，研究黄酮类化合物和对照品维生素E对H202诱导的PCI2细胞损伤的保护作用。应用不同浓度的Ap25-35(1，10，20，30，50uM)对PCI2细胞进行损伤，通过倒置显微镜观察细胞的形态，MTT法测定PCI2细胞的损伤率和存活率，确定出引起细胞损伤的最佳损伤浓度和最佳损伤时间；采用NOS和SOD试剂盒检测AB25-35对PCI2细胞的氧化损伤，并研究黄酮类化合物的抗氧化作用及其机制，使用DCFH—DA结合活细胞高内涵成像系统检测细胞内ROS的水平，进一步探讨黄酮类化合物的抗氧化损伤的作用机制；采用吖啶橙(AcridineOrang

3、e，AO)和溴化乙锭(Ethidiumbromide，EB)双染色法结合荧光显微镜观察细胞凋亡形态；Rhl23结合活细胞高内涵成像系统检测细胞线粒体膜电位的变化；采用钙离子敏感的荧光探针Fura一2／AM检测细胞内游离Ca2+浓度，采用WesternBlot测定活化Caspase-3的表达，进一步研究黄酮类化合物对细胞凋亡的保护作用的可能机制。结果：1，经终浓度为500uM的H202与PCI2细胞共同培养24小时后，可显著降低细胞的存活率，而终浓度为5IIM，10uM，50IlM的黄酮类化合物可明显改善损伤细胞形态，显著提高PCI2细胞的存活率，并呈浓度依赖性。2，经终浓度为10uM的凝聚态

4、AB：。一拍与PCI2细胞共同培养24小时后，可显著降低细胞的存活率，而浓度为5uM，10uM，50IIM的黄酮类化合物可明显改善细胞形态，显著提高PCI2细胞的存活率，并呈浓度依赖性。3，AB：油可触发细胞内的氧化应激反应，造成细胞氧化损伤，提高细胞内ROS水平，显著降低细胞内SOD的活性，提高NOS活性；黄酮类化合物则显著降低细胞内ROS水平，升高SOD的活性，降低NOS的活性，具有明显的抗氧化损伤作用。4．PCI2细胞经10IIM的AD25．35损伤24小时后，采用荧光倒冠显微镜观察细胞凋亡显著增加，不同浓度的黄酮类化合物预处理2小时，可明显改善损伤细胞形态，抑制Ap25．35诱导的线

5、粒体膜电位水平的降低，阻断Ap25-35介导的细胞外Ca2+的大量内流，抑制活化Caspase一3的表达。结论；通过离体实验证明黄酮类化合物对H202和Ap25．35诱导的PCI2细胞损伤有保护作用，为进一步研究黄酮类化合物在阿尔茨海默病中的应用提供实验依据。关键词：黄酮类化合物，H202，B一淀粉样蛋白25-35，PCI2细胞ABSTRACTObjective：Toinvestigatetheprotectiveeffectofflavanoidsanditspossiblemechanismonthebeta-amyloidprotein25—35-inducedinjuriesinra

6、tpheochromocytomacells(PCI2cells)．Methods：ThecytotoxicitytowardPCI2cellsWaSinducedbydifferentconcentrationofH202．WemakesurewhatisthebesttimeandwhatisthemostapproptiateconcentrationofH202toinducecelluarinjuriesbyobservingcellmorphologythroughinvertedmicroscopeanddetectingthedamageandsurvivalratewith

7、MTT．TheprotectiveeffectofflavonoidsandVitaminEincontrolgroupagainstthecytotoxicityinducedbyH202wasrespectivelyinvestigatedinthisexperiment．WegetwhatisthebesttimeandwhatisthemostapproptiateconcentrationofA18