高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激和炎症的影响及α-硫辛酸的干预作用

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1、河北医科大学硕士学位论文高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激和炎症的影响及α--硫辛酸的干预作用姓名：付强申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：苏胜偶201203中文摘要高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激和炎症的影响及Q一硫辛酸的干预作用摘要糖尿病(DiabetesMellitus，DM)，作为一种复杂的代谢紊乱，已成为继癌症和心血管疾病之后的第三大死亡原因。据世界卫生组织估计，到2025年，全球糖尿病患病人数将达到3亿【11。《中国2型糖尿病防治指南》2010年讨论版调查显示：我国目前糖尿病总体发病率已达9．7％，有超过9240万的糖尿病患者

2、；另外还有约15．5％的人处于糖尿病前期，人数达1亿4千8百万以上，高于欧美发达国家。糖尿病慢性并发症现已成为造成糖尿患者致残或过早死亡的主要原因，而糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)作为最常见糖尿病慢性微血管并发症之一，每年因其造成的失明人数超过10，000人【2】。视网膜组织中含有丰富的多不饱和脂肪酸，这使得相对于其他组织，其对血液中氧分子的摄取量最高，由此而产生的氧化应激反应也最强。因此，视网膜对氧化应激较其他组织更为敏感。故有学者指出，高血糖、促氧化与抗氧化系统的平衡和氧化应激之间的关系是DR发病机制中的关

3、键所在。核因子．KB(NF．1cB)作为一种多效性的转录调节因子，在细胞生存、免疫、炎症等方面发挥重要调节作用。此外，NF—v．B不仅是氧化还原反应的敏感因素，而且是抗氧化酶的重要调节器。根据细胞类型和疾病状态的不同，NF．vd3的激活可以是抗凋亡或致凋亡，糖尿病诱导激活的NF．vd3在视网膜以及其毛细血管细胞被认为是致凋亡的【31。细胞间黏附分子．I(ICAM．1)是一种能够介导细胞间黏附的膜表面糖蛋白，它在免疫应答、炎症反应和细胞凋亡等方面发挥重要作用。随着对氧化应激和炎症反应在DR发病机制中的探索，寻找更为合理有效的抗炎抗氧化药物，对提高

4、患者的生活质量、减轻经济负担有重要意义，将成为DR药物研究的新方向。目的：本实验通过体外培养，研究高糖对人视网膜色素上皮(HRPE)细胞形态、细胞活力影响以及氧化应激水平和NF．r．B、ICAM一1表达的变化，并应用高糖和不同浓度的0【．硫辛酸(0【．LA)共同作用于HRPE细胞，再观察上述指标的变化，探讨Q．LA对高糖环境下HR．PE细胞形态、细胞活中文摘要力以及氧化t』‘．K平和NF．1(B、ICAM．1的表达的影响，以研究a。LA对高糖培养的：．E细胞的保护作用并进一步探索该药治疗DR的可能机制。方法：仁、：、}养HRPE细胞株，取生长状

5、态良好的对数期细胞用于实验。将细胞乡：-：3组：(1)正常对照组(葡萄糖浓度：5．56mmol／L)；(2)高糖组(葡萄糖j+：：30．00mmol／L)；(3)高渗对照组(渗透压：30．00mmol／L)；(4)高糖+a．硫0．一(10i上rnol／L)组；(5)高糖+0【一硫辛酸(50gmol／L)组；(6)高糖+伐．硫。：o(100lAmol／L)组；(7)高糖+Oc．硫辛酸(200I-tmol／L)组；(8)高糖+0【．硫、■!(300pmol／L)组。各组细胞在不同的条件培养液中培养48h，留I一’，’仁进行检测。应用MTT法测细胞活

6、力，比色法测丙二醛(MDA)、谷胪!’

7、太(GSH)和超氧化物歧化酶(soD)变化并用WesternBlot法测NF．v,B}。一!i达，ELISA法测ICAM．1含量的变化。结果：1相比正常对；,T／：,7‘ii，高糖组HRPE细胞活性明显受抑制(尸O．05)。2给与0【．LA：·i二预后，相比高糖组，各给药组NF．1(B表达均有所减低(尸

8、05)；除joI：；aol／L浓度组外，其余四个浓度组细胞活性均有所恢复，差别有统计筝，≠‘义(尸O．05)；10阻nol／L浓度组较100pmoFL、200

9、pmol，L、：：mol／L浓度组，300t-Lmol／L浓度组较50lamol／L、100}Jmol／L浓度组的NF表达有差别(尸