高糖对hrpe细胞氧化应激和mmp-2,mmp-9表达的影响以及α-硫辛酸的干预作用

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1、河北医科大学硕士学位论文高糖对HRPE细胞氧化应激和MMP--2,MMP--9表达的影响以及α--硫辛酸的干预作用姓名：左丽娟申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：苏胜偶201203中文摘要高糖对HRPE细胞的氧化应激和MMP．2，MMP．9表达的影响以及Q．硫辛酸的干预作用摘要目的：糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy，DR)是最常见的糖尿病慢性微血管并发症之一，而且是全世界范围内成人导致视力下降，甚至失明的主要因素之一。DR最常见的是黄斑变性和增殖性视网膜病变。随着病程进展，几乎所有的1型糖尿病和一半以上的2型糖尿病患者均有不同程度的视网膜病变，

2、严重的影响了患者的生活质量。DR的发病机制主要有蛋白激酶(proteinkinase，PKC)的激活，糖基化终末产物的堆积，多元醇代谢通路异常，氧化应激学说，炎症反应，多种细胞因子参与等等。氧化应激学说是目前比较公认的发病机制之一，而且趋向认为氧化应激很可能是上述机制的始动因素。高糖刺激下氧自由基清除能力下降，导致氧化产物堆积，在视网膜组织表现尤为突出。氧化应激可能引起PKC激活，糖基化产物增加，多元醇通路等多条代谢途径异常。近年来，基质金属蛋白酶(matrixmetaloproteinases，MMPs)与视网膜病变之间的关系也成为研究热点。舯s是依赖Zn2+的蛋白水解

3、酶家族，其生物学作用主要是促进细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的降解。DR的基本的病理机制就是新生血管的生成，而这一过程的的前提是视网膜基底膜和ECM的降解，周细胞的迁移。血管基底膜最主要的胶原成分是Ⅳ型胶原，MMP．2，MMP．9是降解Ⅳ型胶原最关键的明胶酶。国内外研究，不管是DR患者的临床试验，糖尿病动物模型，还是高糖下培养视网膜细胞均证实MMP．2，MMP．9表达活性的增加。说明N／[1VIPs在DR的发病过程中起到了重要的作用。但是高糖刺激MⅣ[Ps活性增加的具体机制尚未明确。而硫辛酸作为应用广泛作用较强的抗氧化剂，在视网膜细胞也无一例

4、外。国内已有研究，将50I．tl的丙烯醛作用于人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelial，HRPE)细胞造成氧化损伤，观察不同浓度的硫辛酸的干预作用，结果证明一定浓度的硫辛酸对其有保护作用。本实验通过不同浓度的硫辛酸作用于高糖体外培养HRPE细胞48小时，观察MMP一2，MMP一9的表达活性及氧化应激指标的变化，探讨高糖引起MMP$表达变化中文摘要的机制以及硫辛酸的保护作用，有可能为寻找DR的预防和治疗找到新的途径。方法：体外培养HRPE细胞，选取生长状态良好的对数期细胞入组。实验分为八组：正常对照组(glucose5．56mmol／L，

5、DMEM培养液)，高糖组(glucose30mmol／L，DMEM培养液)，五个药物干预组：(0‘一硫辛酸浓度分别为109mol／L、509mol／L、100pmol／L、2009mol／L、3009rnol／L加入glucose30mmol／L，DMEM培养液)，甘露醇组(mannitol30mmol／L)，培养48小时，观察HRPE细胞的形态，MTT法检测生存活力，比色法检测过氧化物酶(SOD)，还原性谷胱甘肽(GSH)，丙二醛(ⅧA)，WesternBlot检测MMP．2，MMP．9蛋白表达量。结果：l与正常对照组相比，高糖组的SOD，GSH表达活性均明显减低，MD

6、A含量明显增加，有统计学差异(P0．05)。加入硫辛酸干预，SOD，GSH的表达活性增加，MDA含量减少，除109mol／L组外，其余各组均较高糖组有统计学差异(PO．05)。2与正常对照组相比，高糖组的MMP．2，MMP．9的蛋白表达量均

7、显著升高，有统计学差异(PO．05)。加入硫辛酸干预，MMP．2，MMP．9的蛋白表达量均有所下降，除109mol／L组外，其余各组均较高糖组有统计学差异(户O．05)。结论：l高糖环境可以引起视网膜色素上皮细胞的氧化应激，以及MMP．2，MMP．9的表达活性增加，可能在糖尿病视网膜病变的过程中发挥重要作用。中文摘要2高糖可能通过