降钙素对大鼠膝关节骨性关节炎潜在保护作用及其机制

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1、河北医科大学博士学位论文降钙素对大鼠膝关节骨性关节炎潜在保护作用及其机制姓名：程潭申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：张柳201204中文摘要降钙素对大鼠膝关节骨关节炎潜在保护作用及其机制摘要第一部分：降钙素对前交叉韧带切断大鼠膝关节软骨退变的影响目的：探讨早期应用降钙素(calcitonin，CT)干预对前交叉韧带切断(anteriorcruciateligamenttransection，ACLT)导致的大鼠不稳定膝关节骨关节炎(osteoarthritis，OA)模型中的关节软骨退变的影响。方法：将30只3月龄SPF级雄性Sprague．Dawley(SD)大鼠，随机分为

2、三组，每组10只动物，即：假手术组(Sham)、前交叉韧带切断+盐水(normalsaline，NS)组(ACIn-NS)和前交叉韧带切断+降钙素组(ACLT+CT)。ACLT+NS组和ACLT+CT组大鼠于右膝关节行ACLT术，术后ACLT+CT组中大鼠给予CT5IU／kg／2d皮下注射，ACI肿-NS组中大鼠给予等容量NS皮下注射，Sham组中大鼠只做膝关节腔打开而不行前交叉韧带切断，术后给予等容量NS皮下注射。造模术后12周处死各组动物，打开右膝关节腔后，观察各组大鼠膝关节软骨面并拍照记录。去除右侧股骨软组织后，用70％酒精固定大鼠股骨样本，固定72小时后采用EDTA．2Na

3、制成脱钙液进行脱钙处理，约6周后待钙盐彻底脱失骨组织变软，然后行常规梯度酒精脱水、二甲苯透明后进行石蜡包埋切片，将厚度约为6-8#m的骨组织石蜡切片分别行番红．O／快绿(safranin．O／fastgreen)及苏木素／伊红(hematoxylin．eosin，HE)染色，用于关节软骨组织形态学观察，同时采用Mankin评分方法定量分析关节软骨损伤情况；采用免疫组化方法检测各组大鼠膝关节软骨中II型胶原(typeIIcollagen)、蛋白多糖分解酶-4(adisintegrinandmetalloproteinasedomainwiththrombospondinmotifs一

4、4，ADAMTS一4)及基质金属蛋白酶．3(matrixmetalloproteinase．3，MMP．3)表达情况，应用Imagepro．Plus6．0软件对免疫组化阳性蛋白表达情况进行积分光密度(integratedopticaldensity，IOD)计算，定量分析各组大鼠膝关节软骨阳性细胞表达差异。结果：中文摘要1．大鼠膝关节软骨表面大体观察发现：Sham组大鼠膝关节软骨面光滑完整；而ACLT+NS组因行ACLT术，12周后观察可见大鼠膝关节软骨面晦涩，可见关节面明显破溃，关节周围可见较大骨赘形成；而给予CT干预大鼠膝关节软骨面显粗糙，偶见小破溃，关节周围亦有较小骨赘形成。

5、2．关节软骨safranin．O／fastgreen、HE染色形态学观察发现：Sham组大鼠关节软骨面完整，软骨与软骨下骨界限清晰，基质着色均匀一致，细胞排列有序；ACLT+NS组术后12周大鼠关节软骨关节面严重破坏，．软骨与软骨下骨界限模糊不清，基质着色不均，细胞呈团簇状克隆增殖，且分布不均，软骨细胞数目明显减少；ACLT+CT组大鼠软骨表面可见小裂隙存在，软骨与软骨下骨界限较为清楚，基质着色较为均一但着色略显变浅，细胞排列亦稍显紊乱。3．关节软骨损伤Mankin评分显示：ACLT+NS组Mankin评分显著高于Sham组，差异具有统计学意义(P

6、nkin评分显著低于ACLT+NS组，差异具有统计学意义(P

7、应用CT皮下注射能够刺激软骨细胞II型胶原合成，同时抑制ADAMTS。4和MMP．3表达，减轻由膝关节不稳定造成的OA大鼠膝关节软骨损伤。第二部分：降钙素对前交叉韧带切断大鼠膝关节软骨下骨作用目的：降钙素(calcitonin，CT)作为一种骨转换调节剂而被用于骨代谢疾病的预防与治疗中。本实验在大鼠膝关节前交叉韧带切断(anteriorcruciateligamenttransection，ACLT)动物模型基础上，早期给予CT进行干预，观察CT对大鼠膝关节软骨下骨B