tcdca对佐剂性关节炎模型大鼠治疗作用及其作用机制的研究

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1、摘要类风湿性关节炎（Rheumatoidarthritis，RA）是一种慢性自身免疫性疾病，伴随着复杂的炎症介质导致关节的损害、滑膜炎症、软骨和骨的损坏，导致人类和动物严重的机体功能障碍。尽管RA的病因及发病机制尚未完全明确，但其主要的病理过程环节基本清楚，即免疫功能失调、关节滑膜组织增殖增厚、软骨与骨破坏等三个方面。目前尚缺乏真正有效而副作用小的治疗药物，因此，寻找作用显著、副作用小的天然活性成分逐渐成为RA药物的研究热点。牛磺鹅去氧胆酸（TaurochenodeoxycholicAcid，TCDCA）是动物胆汁酸中具有生物活性的主要有效成分之一，从动物胆汁酸中分离提取纯化的T

2、CDCA对动物机体的急、慢性炎症均有显著的抑制作用；对机体的体液免疫、细胞免疫和吞噬功能均有显著的调节作用。在前期研究的基础上，本研究以佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠为对象，观察了具有较高抗炎免疫调节活性的TCDCA的抗类风湿性关节炎作用，同时从影响AA模型发展的关键细胞因子和核转录因子-κB（NF-κB）活性方面探讨了其治疗AA模型可能的药理作用机制，为将其开发为治疗RA的新药奠定实验基础。本课题的主要研究内容包括以下五个方面：（1）AA模型大鼠的建立与评价通过比较常用关节炎动物模型的诱导方法，本研究优化筛选出了高成功率、临床症状典型、稳定的诱导A

3、A模型的方法。通过关节炎动物模型的评价标准，本试验建立的AA模型大鼠，造模15d时模型大鼠的对侧脚踝关节、足跖部出现明显的肿胀、四肢爪子表面出现红斑、尾根明显肿胀结节，对侧脚的肿胀率达到25.15%，随着时间的延长对侧脚踝关节、足跖部肿胀率不断增大；造模30d时大鼠的四肢严重肿胀、尾巴出现明显结节，关节炎指数达到14.25，对侧脚的肿胀率达到48.09%，X-ray拍片显示骨骼之间界限模糊，骨密度降低，踝关节部和趾部软组织明显增厚。通过3次重复试验显示，本实验建立的AA模型较为稳定，成功率均在80%以上。（2）TCDCA对AA模型大鼠的治疗作用AA模型大鼠连续灌胃给药高低剂量TC

4、DCA（0.2g/kg.b.w、0.1g/kg.b.w）14d后，根据模型评价标准对给药前后的关节炎动物模型进行了评价。结果：模型大鼠锐减的体重得到显著性的恢复，增重率分别由25.57%提高到44.41%、46.02%；模型大鼠四肢及尾根呈现的红斑、肿胀得到一定程度的缓解，关节炎指数分别由13.38降为10.44、10.03；模型大鼠对侧脚肿胀率分别由50.17%降为47.96%、45.83%。通过X-ray观察，模型大鼠两后肢踝关节和趾部骨骼的明显肿大，趾部各骨骼之间界限模糊，骨密度降低，踝关节部和趾部的软组织明显增厚等特征均得到一定程度的减轻。以上结果显示TCDCA对AA模型

5、大鼠呈现出良好的治疗作用。（3）TCDCA对AA模型大鼠体内关键细胞因子的影响通过ELISA法和RT-PCR技术分别检测了AA模型大鼠血清和滑膜组织中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10蛋白和mRNA水平的表达。结果，分别灌胃给药AA模型大鼠高低剂量TCDCA（0.2g/kg.b.w,0.1g/kg.b.w）14d和31d后，TCDCA可显著的抑制AA大鼠血清中过度分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白和滑膜组织中mRNA水平的表达(P<0.05)；高剂量（0.2g/kg.b.w）TCDCA连续给药31d后可显著的提高模型大鼠血清中IL-10的含量和滑膜组织m

6、RNA水平的表达量(P<0.05)。（4）TCDCA对AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）和腹腔巨噬细胞（PMΦ）中关键细胞因子的影响采用组织块培养法获得形态典型、单一的FLS细胞。采用ELISA法检测了AA模型大鼠FLS细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10蛋白的含量，同时采用RT-PCR法测定了相应细胞因子mRNA水平表达的变化。结果：TCDCA（300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL）均可显著的抑制AA模型FLS细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的含量(P<0.05)，而对IL-10蛋白则无显著性的影响（P>0.05）

7、；TCDCA（300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL）可显著抑制FLS细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6基因的表达量(P<0.05)，TCDCA（500μg/mL）显著上调IL-10基因的表达量(P<0.05)。采用PBS腹腔灌洗法获得高纯度的PMΦ细胞；采用ELISA法测定了AA大鼠PMΦ细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10蛋白的含量；采用RT-PCR技术检测了相应细胞因子mRNA水平表达的变化。结果：TCDCA（150μg/mL、