基于血小板活化研究新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠的作用机制

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1、湖北中医药大学博士学位论文基于血小板活化研究新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠的作用机制姓名：纵瑞凯申请学位级别：博士专业：中医内科学指导教师：刘健20120504中文摘要1目的以中医理论为指导，分析、总结血小板活化在类风湿关节炎(rheumatoidarthritiS，RA)发病中的作用及其中医机制；通过动物实验，观察佐剂性关节炎(adjuvantarthritiS，从)大鼠血清血小板活化因子(plateletactivatingfactor，PAF)，外周血血小板参数、血小板0【颗粒膜糖蛋白(granulemembraneprotein140，GMP一140)、血小板分化抗原40

2、配体(clusterofdifferentiation401igand，CD40L)，胸腺GMP-140、CD40L、CD40LmRNA，血小板超微结构的变化及体质量、足跖肿胀度、关节炎指数(arthritiSindex，AI)、白细胞介素(interleukin，IL)-1、IL-6、IL-17、肿瘤坏死因子(tumornecrosiSfactor，TNF)一仅、IL-IO的变化和健脾益气中药新风胶囊(XinfengCapsules，XFC)对从大鼠的疗效及上述指标的影响，并基于血小板活化探讨XFC对从大鼠的作用机制。从而丰富RA“从脾论治，整体调节"科学内涵，为中医药治疗

3、RA的机理研究提供新的思路。2方法2．1理论研究通过文献研究，总结、分析血小板活化与中医血瘀证、RA、中医脾虚的关系。从中医理论角度，阐释RA血小板活化“从脾论治力的机制。2．2实验研究’将40只sD(spraguedawley，SD)雄性大鼠按随机数字表分为5组：正常对照(normalcontrol，NC)组、模型对照(modelcontrol，MC)组、雷公藤多甙片(tripterygiumwilfordiipolyglycosidetablet，TPT)组、甲氨喋呤(methotrexate，MTX)组和XFC组，每组8只，除Nc组外，向每只大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全

4、佐剂(freund’Scompleteadjuvant，FCA)O．1ml致炎，复制成从大鼠模型，于致炎后第19天开始给予相应药物治疗，①TPT组：将TPT研成细末，加生理盐水配制混匀，按10ml／kg灌胃，每天1次。②MTX组：将MTX研成细末，加生理盐水配制混匀，按10ml／kg灌胃，每周1次；未给药的实验日，给予生理盐水灌胃，10ml／kg，每天1次。③XFC组：将XFC去除胶囊壳研成细末，加生理盐水配制混匀，按10ml／kg灌胃，每天1次。④Nc组及Mc组予生理盐水灌胃，1Oml／kg，每天1次，连续用药30天。实验过程中观察各组大鼠的体质量、足跖肿胀度、AI。实验结

5、束后检测大鼠各指标：采用酶联免疫吸附(enzyme-1inkedimmunosorbentassay，ELISA)法检测各组大鼠血清PAF、IL-1、IL-6、IL-17、TNF-0【、IL-10的表达，流式细胞仪检测大鼠外周血GMP-140、CD40L表达，免疫组化法检测胸腺CD40L的表达，逆转录一聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT—PCR)法检测胸腺CD40LmRNA的表达，免疫蛋白印迹(westernblotting，WB)法检测胸腺GMP-140的表达，透射电镜观察血小板超微结构的变化。3结果3

6、．1理论研究结果3．1．1血小板活化在RA的发生、发展中起重要作用：血小板及其活化产物促进了RA滑膜炎症的发生与发展、滑膜组织的增生、血管翳的形成、软骨及骨破坏。3．1．2血小板活化是中医血瘀证本质的重要表现：血瘀证本质表现之一为血小板活化，血小板活化参与了血瘀证的发生与发展，是血瘀证产生的重要生理、病理基础。3．1．3血瘀证贯穿于RA病程的始终：血瘀在RA发病过程中既可成为主要的致病因素，又可作为主要的病理机制而贯穿于整个疾病的始终。3．1．4脾虚是RA血瘀证产生的重要因素：脾虚引起的运化失职、化源匮乏、脾不统血、阳虚寒凝均可致瘀。RA血小板活化的中医机制在于脾虚，应当“从

7、脾论治"。3．2实验研究结果3．2．1从大鼠血小板参数、活化指标及超微结构的变化：与NC组比较，Mc组从大鼠血清PAF，外周血PLT、PCT、GMP-140、CD40L，胸腺GMP-140、CD40L、CD40LmRNA表达显著升高(P<0．01)，血小板超微结构破坏严重。3．2．2从大鼠体质量、足跖肿胀度、Al的变化：致炎前，各组大鼠的体质量比较，差异无统计学意义(P>0．05)；给药前1d，与Nc组相比，Mc组大鼠体质量明显减轻(P<0．05)，足跖肿胀度、AI显著升高(P<0．01)。3．2．3从