关节炎丸对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的实验研究.doc

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1、关节炎丸对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的实验研究【摘要】目的：探讨关节炎丸治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法：制作实验性关节炎大鼠(AdjuvantArthritis,AA)动物模型，观察关节炎丸对大鼠血浆TNFα及IL1β影响，并与雷公藤阳性对照组进行比较。结果：关节炎丸抑制炎症组织中TNFα及IL1β优于雷公藤组。结论:关节炎丸通过影响炎症介质的释放而产生抗炎镇痛和抗风湿作用。【关键词】关节炎丸；类风湿性关节炎；佐剂类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的慢性全身性自身免疫性疾病，它具有表现复杂、反复发作、缠绵难愈，致残率高的特点

2、，为临床疑难杂病之一。导师牟慧琴教授近十年来一直从事于张仲景经典著作《金匮要略》教学与内科临床，主攻疑难杂证，在风湿病、类风湿疾病、老年性腰腿病、面瘫、哮喘病、神经官能症、妇女更年期疾病、眩晕病、萎缩性胃炎等方面都有较为深刻的认识，尤其在诊治类风湿性关节炎方面积累了丰富的经验并颇具特色，导师通过对临床经验的总结研制出便于RA患者服用并可巩固疗效的中成药“关节炎丸”，在临床中疗效显著。经初步药效学研究表明，关节炎丸对实验性佐剂性关节炎有明显的抗炎镇痛作用，为进一步探讨关节炎丸治疗RA的作用机理,我们用Wistar大鼠制作AA模型,观察关节炎丸抗风湿的作用机理，现将实验资料报告如下：1材料与

3、方法1.1实验动物与分组Wistar大鼠50只，雌雄各半，年龄为45-50d，体重(200±20)g，购于甘肃中医学院动物科研实验中心(实验动物质量合格证编号和实验动物使用许可证号：SCXK(H)2004-0006-0000005)，动物饲料：由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。50只大鼠雌雄分开，于实验前驯养1周后，按体重编号，随机分为5组(每组雌雄各半)：正常对照组(正常组n=10);模型对照组(模型组,n=10)；关节炎丸高剂量治疗组(GJYWH组，n=10)；关节炎丸低剂量治疗组(GJYWL组,n=10)；雷公藤治疗组(雷公藤组,n=10)。1.2药品与试剂关节炎丸由制附片、制

4、川乌、细辛、党参、黄芪、桂枝、白芍、甘草等配伍组成,其中制附片、制川乌、细辛应先煎30min后再把其余药放入一起水煎、过滤并加热浓缩致相应浓度。雷公藤片剂由湖南协力药业有限公司生产(批号:Z43020138，国药准字)，给药时临时研粉调制，将5mg的雷公藤片研末再加入50ml的水配成溶液。完全福氏佐剂(CFA)购于Sigma公司；TNFα试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供(生产批号：20060725)，IL1β由北京华英生物技术研究所提供。1.3AA大鼠模型制备与检测方法3在实验第一天进行造模:用75%酒精对除正常对照组外大鼠右足跖进行消毒，将CFA0.1ml/只，注射于大鼠右

5、足跖皮下(于后肢足跖皮内注射FCA0.1ml的量能明显提高AA大鼠造模的成功率，较以前文献报道的FCA0.05ml注射量，背部多点注射法等有较大的改进［１］)。正常对照组大鼠则注射生理盐水0.lml/只。各组动物最后一次灌胃后，禁食不禁水24h后全部处死取材。血清标本的制备：股动脉采血5ml，37℃水中静置0.5h，以3000转/min,离心15min，取上清液放入尖底试管中，置于4℃冰箱内保存，送兰州解放军总院药物研究所待测TNFα及IL1β。1.4给药方法给药第3d起开始定时灌胃给药，每日1次,根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值，关节炎丸浓煎液GJYWH组每次3ml/只，

6、GJYWL组每次1.5ml/只,灌胃前将药液静置到室温，摇匀给药；雷公藤多甙片溶液研制后给予每次2ml/只，摇匀给药；正常组、模型组给予等量生理盐水。1.5统计学处理对所有符合实验方案要求的数据均输入计算机,用SPSS11.0统计软件处理，实验数据以均数±标准差(±s)表示，根据方差齐性采用单因素方差分析(OneWayANOVN)P＜0.05有统计学意义。2结果各组大鼠血清IL1β、TNFα含量的比较(见表1)注：与空白组比较#P＜0.05；与模型组比较△P＜0.05。3讨论　　RA的病因与发病机制目前尚未完全阐明,但随着细胞分子学和免疫学的深入研究,RA动物模型的建立,发现了细

7、胞因子、TH1/TH2细胞平衡、性激素等在RA的发病中起重要作用。其中人们已证实TNFα及IL1β在RA进展中起着决定性作用［2］：TNFα是机体炎症反应与免疫应答的重要调节因子,能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶,导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏,TNFα既能刺激IL1β,IL6,IL8的产生,又能刺激其自身的合成，在RA的细胞因子网络中起中心作用；IL1分为IL1α和IL1β,主要由巨噬细胞分泌，