耐辐射球菌ppri蛋白细胞毒性及免疫毒性的研究

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1、七年制专业学位论文论文题目耐辐射球菌PprI蛋白细胞毒性及免疫毒性的研究毕洁静研究生姓名杨占山指导教师姓名临床医学七年制专业名称放射毒理学研究方向2012-6-15论文提交日期学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论

2、文作者签名：毕洁静日期：2012.5学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文□本学位论文

3、属在年月解密后适用本规定。非涉密论文论文作者签名：毕洁静日期：2012.5导师签名：杨占山日期：2012.5耐辐射球菌PprI蛋白细胞毒性及免疫毒性的研究中文摘要中文摘要目的：pprI基因是耐辐射球菌中的特有基因，被认为是耐辐射球菌DNA修复与保护途径的总开关，基因的表达产物PprI蛋白是一种促进DNA修复的多效蛋白的诱导物。近年来我科室研究人员研究证实pprI基因转染对哺乳动物中子和γ射线急性放射损伤具有显著的防治作用，原核表达纯化取得的PprI蛋白，也被证实对γ射线辐射损伤小鼠具有一定的抗放作用。

4、本课题在此蛋白作用机制的基础上，对其细胞毒性及免疫毒性作了初步的研究，为其以后的临床应用前安全性评价提供依据，目前关于此蛋白的毒性研究，尚未见国内外文献报道。材料与方法：PprI蛋白由本实验室张永芹硕士通过原核表达纯化,以人脐静脉血管内皮细胞为作用对象，应用MTT法检测PprI蛋白对细胞的增殖、毒性作用，采用细胞克隆法检测该蛋白对辐射细胞存活的影响，并绘制出剂量存活曲线。以ICR小鼠作为免疫对象，实验组分为生理盐水免疫组和PprI蛋白免疫组，通过免疫器官脏器系数及T淋巴细胞亚群变化观察此蛋白对小鼠免疫功

5、能的影响。结果：本课题初步研究得出，PprI蛋白浓度为2.5、5、10ug/ml范围内对细胞产生4抑制作用，且抑制作用与蛋白浓度呈正相关，细胞密度0.5×10作用时间24h的细胞半抑制率IC50为6.40ug/mL。照射剂量为6Gy时，PprI蛋白浓度为100、200、400、600ng/ml范围内对细胞产生增殖作用，蛋白浓度400ng/mL作用36h时增殖作用最为显著。由多靶单击模型拟合的细胞存活曲线得知，PprI蛋白组D0值为1.33，Dq值为1.17，N值为2.41，SF2值为0.51，各值均高于

6、单纯照射组。在小鼠免疫及免疫后三周的观察期间内，计算免疫器官脏器系数可知，免疫初期即初次免疫后14天，高剂量组肾脏重量系数显著低于生理盐水对照组（P＜0.05)，1中文摘要耐辐射球菌PprI蛋白细胞毒性及免疫毒性的研究中、高剂量组胸腺重量系数均显著高于生理盐水对照组（P＜0.05)；免疫末期即末次免疫后3天，低剂量组肾脏重量系数显著低于生理盐水对照组（P＜0.05)，高剂量组胸腺重量系数显著高于生理盐水对照组（P＜0.05)；恢复期即末次免疫后3周，高剂量组肝脏重量系数显著高于生理盐水对照组（P＜0.0

7、5)，低剂量组胸腺重量系数显著高于生理盐水对照组（P＜0.05)。由T淋巴细胞亚群检测结果+可知，末次免疫后3天，中剂量组小鼠脾脏CD3T细胞含量显著高于生理盐水对++照组（P<0.05），高剂量组CD3CD8T细胞含量显著高于生理盐水对照组（P<0.05），高剂量组CD4/CD8比值显著低于生理盐水对照组（P<0.05）。结论：1.研究得知PprI蛋白浓度达到2.5、5、10ug/ml时对细胞增殖产生抑制作用，4且抑制作用与蛋白浓度呈正相关，细胞密度0.5×10作用时间24h的细胞半抑制率IC50为6

8、.40ug/mL。PprI蛋白浓度为100、200、400、600ng/ml时对细胞产生增殖作用，蛋白浓度400ng/mL作用36h时增殖作用最为显著。2.由多靶单击模型拟合剂量存活曲线及所得放射生物学参数得知，PprI蛋白可以使细胞的平均致死剂量增大，放射抗拒性增强，细胞修复能力增强。3.PprI蛋白对小鼠免疫器官的影响主要表现在中枢免疫器官胸腺及主要脏器肾脏，且刺激具有可逆性。对脾脏、肝脏基本无毒性作用。+++4．PprI蛋白一定程度上