超声介导lhrha靶向紫杉醇脂质体—微泡耦联体对卵巢癌细胞的体外杀伤作用

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1、重庆医科大学硕士学位论文超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体--微泡耦联体对卵巢癌细胞的体外杀伤作用姓名：陈佳申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：孙江川201205重庆医科大学硕士研究生学位论文超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体一微泡耦联体对卵巢癌细胞的体外杀伤作用1摘要第一部分LHRHa靶向紫杉醇脂质体一微泡耦联体的制备及体外寻靶检测目的：构建LHRHa靶向紫杉醇脂质体一微泡耦联体，并检测该耦联体对卵巢癌A2780／DDP细胞的体外寻靶能力。方法：1、采用薄膜一超声分散法制备普通紫杉醇脂质体、生物素化紫杉醇脂质体及LHI

2、Ⅲa靶向紫杉醇脂质体，测定生物素化紫杉醇脂质体粒径电位，透射电镜考察其形态，高效液相色谱法测定三种紫杉醇脂质体包封率。将荧光素NBD标记的胆固醇加入原料中制备NBD标记的生物素化脂质体，为荧光鉴定实验准备。2、机械振荡法制备生物素化脂质微泡，测定其浓度、粒径和电位。3、通过生物素一链霉亲和素桥接法制备LHIma靶向脂质体一微泡耦联体，激光共聚焦观察脂质体与脂质微泡耦联体形态，流式细胞仪检1本课题受国家自然科学基金(编号：30801228)、重庆市自然科学基金(编号：csTc，2008BB5405)：及重．庆市卫生局项目(编号：

3、07—2一098，2010一卜39)资助。本研究的实验条件由超声医学工程省部共建国家重点实验室、重庆市超声医学工程重点实验室提供。2重庆医科大学硕士研究生学位论文测耦联效率，荧光显微镜下观察LHRHa靶向脂质体．微泡耦联体对卵巢癌A2780／DDP细胞的体外寻靶能力。结果：1、采用薄膜超声法制备的普通紫杉醇脂质体，生物素化紫杉醇脂质体及LHIma靶向紫杉醇脂质体，粒径均较均匀，其中生物素化紫杉醇脂质体平均粒径为120．5m。制备的三种脂质体包封率均大于90％。2、采用机械振荡法制备的生物素化微泡一般形态显示良好。平均粒径120

4、8nm。3、以生物素一链霉亲和素连接法制备的LHIma紫杉醇脂质体一微泡耦联体有良好的形态。流式细胞仪检测耦联效率显示100ul浓度为10mg／ml的脂质体加入到个数约为2×107的微泡中时，微泡携带的脂质体量达到最大。经HPLC检测制备的1×109个脂质体．微泡耦联上载紫杉醇约1．6mg，体外寻靶实验显示LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体能与LHIm受体阳性的A2780／DDP细胞特异性结合，而非靶向的耦联体则不能与细胞结合。结论：采用生物素一链霉亲和素方法可以成功制备LHRHa靶向紫杉醇脂质体．微泡耦联体，该靶向耦联体

5、具有体外寻靶能力。第二部分超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体一微泡耦联体对卵巢癌A2780／DDP细胞的体外杀伤作用目的：探讨超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体一微泡耦联体对体重庆医科大学硕士研究生学位论文外培养的卵巢癌A2780／DDP细胞的生长抑制及调亡诱导作用。方法：体外培养人卵巢癌A2780／DDP细胞，根据不同处理因素分为8组：1．空白组；2．空白脂质体．微泡组；3．紫杉醇组：4．紫杉醇脂质体组；5．靶向紫杉醇脂质体组；6．靶向紫杉醇脂质体．微泡组：7．靶向紫杉醇脂质体+超声组：8．靶向紫杉醇脂质体一微泡+超声组。应

6、用MTT比色法检测各组细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，透射电镜观察LHIma靶向紫杉醇脂质体．微泡耦联体联合超声作用后细胞超微结构的变化。结果：随着作用时间的延长，细胞的存活率逐渐下降。靶向紫杉醇脂质体一微泡联合超声组的细胞存活率最小，24h、48h、72h细胞存活率分别为(52．32±2．85)％、(35．30±1．27)％、(23．22±2．11)％，与其他处理组相比，差异具有统计学意义(P<0．05)。细胞凋亡检测发现超声联合靶向紫杉醇脂质体一微泡耦联体作用24h细胞凋亡率达(37．15±1．01)％，与其他组相

7、比，差别有统计学意义(P

8、RIANCANCERCELLINVITRoABSTRACTf'ARToNEPreparationOfLHRHa-targetedPaclitaxelLiposomes—MicrobubblescomplexandtargetingstudyinvitrOObjectiVe：T