超声联合lhrha-靶向微泡沉默survivin基因对卵巢癌a2780ddp细胞侵袭及转移能力的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文超声联合LHRHa--靶向微泡沉默Survivin基因对卵巢癌A2780/DDP细胞侵袭及转移能力的影响姓名：李耀威申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：孙江川201205超声联合LHRHa-靶向微泡沉默Survivin基因对卵巢癌A2780／DDP细胞侵袭及转移能力的影响摘要1第一部分凋亡抑制基因Survivin在卵巢癌细胞中的表达目的：测定Survivin蛋白在三种卵巢癌细胞系中的表达，选择其中Survivin表达较高的细胞系进入后续部分的实验。方法：引入三种卵巢癌细胞系：A

2、2780／DDP、SKOV3、H089i0，分别进行体外培养。通过免疫荧光技术定性、Western—blot方法定量测定Survivin蛋白的表达水平。结果：①免疫荧光测定结果：以各种细胞系中荧光细胞发生率做比较，H089lO、SKOV3、A2780／DDP三种细胞系的荧光细胞发生率分别为75．34％±2．52％、74．77％±2．65％、81．04％±2．12％；@Western—blot测定结果：以各种细胞系中Survivin／B-actin做比较，H08910、SKOV3、A2780／DDP三种细胞系

3、的比值分别为0．(524±0．028、0．638±0．029、0．702±0．017。综上，H08910细胞系和SKOV3细胞系的Survivin蛋白表达量差别不大(P>O．05)；A2780／DDP细胞系的Survivin蛋白表达量较前两者高(fl

4、80／DDP细胞侵袭及转移能力的影响目的：通过超声破坏LHRHa一靶向微泡转染pshRNA—Survivin，观察RNA干扰对人卵巢癌A2780／DDP细胞survivin基因的沉默效应及对细胞侵袭转移能力的影1．本课题受国家自然科学基金(编号：30801228)、重庆市自然科学基金(编号：CSTC，2008BB5405)及重庆市卫生局项目(编号：07—2—098，2010—1—39)资助。本研究的实验条件由超声医学工程省部共建国家重点实验室、重庆市超声医学工程重点实验室提供。响。方法：构建靶向surviv

5、in基因的短发夹状RNA重组表达质粒pshRNA—survivin。将对数生长期的A2780／DDP细胞随机分为7组：空白对照组、单纯质粒组、质粒+普通微泡组、质粒+靶向微泡组、质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组及质粒+靶向微泡+超声辐照组。分别给予相应处理，应用western—blot检测survivin蛋白的表达：MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质粘附能力；利用transwell小室检测卵巢癌细胞侵袭转移能力；western—blot检测细胞中MMP-2、E-cadherin蛋白表达。结果：①

6、与对照组比较，质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组、质粒+靶向微泡+超声辐照组survivin蛋白明显降低(仄0．05)，穿透重组基质膜数目明显降低(p

7、辐照组(p

8、TSOFUIJRASOUNDDESTRUCTINGLHRHa．TARGETEDMICROBUBBLEMEDIATEDSURVIVINTARGETEDSILENCINGONTHEMIGRATIONANDMETASTASISOFO、厂ARIANCANCERA2780／DDPCELLSABSTRACTPARTIExpressionofSurvivininovariancancercelllinesObjective：T