大鼠第四脑室外侧隐窝区神经干细胞的形态学观察

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1、河北医科大学硕士学位论文大鼠第四脑室外侧隐窝区神经干细胞的形态学观察姓名：刘艳红申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：马常升；朱望东201203中文摘要大鼠第四脑室外侧隐窝区神经千细胞的形态学观察摘要目的：神经干细胞是指具有分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新，并能提供大量脑组织细胞的细胞群。目前已经证实在成年鼠的纹状体、海马、室管膜下区等多部位存在神经干细胞。近年来，BennettL等报道在室周器官也发现了神经干细胞。第四脑室外侧隐窝区因其特殊性而被列为室周器官来描述。本试验主要以健康SD大鼠和健康的BrdU模型鼠

2、为研究对象，采用Nestin、BrdU和Sox2免疫组织化学方法和Nestin、Sox2以及BrdU、Sox2免疫荧光组织化学双标的方法来探讨第四脑室外侧隐窝区是否存在神经干细胞并对它的形态进行观察。方法：首先，选取健康大鼠1O只，经腹腔注射BrdU生理盐水注射液后制成BrdU模型鼠。然后分别对12只健康SD大鼠和lO只BrdU模型鼠在第四脑室外侧隐窝区切取多个组织块，并常规制成石蜡切片和冰冻切片，应用Nestin、BrdU和Sox2免疫组织化学方法和Nestin、Sox2以及BrdU、Sox2免疫荧光组织化学双标的方法研究外侧隐窝区的脑组织，在Olympu

3、sBx．VCB显微镜照相系统观察、照相，观察有无神经干细胞特有的Nestin、BrdU和Sox2阳性细胞的表达，以证实外侧隐窝室管膜及室管膜下有无神经干细胞的存在并对其形态学特征进行描述，对其分布情况做统计学分析。结果：l甲苯胺蓝染色：第四脑室外侧隐窝室管膜细胞染色深浅不一，形态多样，有杆状、梭形、立方形和椭圆形等。室管膜细胞排列不均匀，有的部位密集，有的部位稀疏。总体来说，外侧隐窝室管膜的外侧1／3区的细胞轮廓显示不清，有单层排列，有双层和三层排列，有的细胞还聚集成团，它与脉络丛相连，过度区清晰可见，其根部可见2—3个血管；室管膜的中l／3区的细胞多呈单层

4、排列，分布稀疏不等，背部细胞排列紧密，腹部细胞排列稀疏；室管膜的内侧1／3区的细胞呈单层排列，分布均匀。室管膜下有丰富的小血中文摘要管，血管周围有成团的细胞存在，有的细胞体积较大成椭圆形，细胞核明显，这些细胞也有两两聚在一起，紧贴于室管膜下。2Nestin免疫组织化学染色：室管膜细胞未见Nestin阳性细胞，而脉络丛上阳性细胞多见，其中带有空泡的细胞周围偶见阳性细胞，而无空泡的细胞周围阳性细胞多见。小脑的颗粒细胞可呈Nestin强阳性，胞质中含有强阳性颗粒，而它的细胞核清晰可见，呈Nestin阴性。3SOX2免疫组织化学染色：SOX2阳性细胞在外侧隐窝室管膜

5、较多见，脉络丛则未见阳性细胞。室管膜的阳性细胞分布不均匀，我们把外侧隐窝腹侧部的入口和出口之间的室管膜平均分为三个区域，分别为内侧区、中间区和外侧区。外侧隐窝腹侧部内侧区的SOX2阳性细胞排列密集而整齐，多呈单层；中间区的阳性细胞排列较松散，可见双层细胞；外侧区的阳性细胞排列稀疏。外侧隐窝背侧部内侧区的SOX2阳性细胞的分布有所不同，其间有一明显的分界线，分界线内侧的阴性细胞多位于阳性细胞之上，排列紧密，呈2--3层；分界线外侧处的阳性细胞多位于阴性细胞之上，呈单层或双层排列。背侧部外侧区的SOX2阳性细胞与阴性细胞在一层呈间隔排列。．4BrdU免疫组织化学

6、染色：外侧隐窝的室管膜未发现BrdU阳性细胞的分布，脉络丛上可见BrdU阳性细胞的散在分布，核呈圆形或椭圆形，染色深。5Nestin和SOX2免疫荧光双标染色：．Nestin阳性细胞显示绿色荧光，SOX2阳性细胞显示红色荧光，免疫荧光双标染色的结果显示：Nestin阳性细胞多见于脉络丛处，室管膜则少见，仅发现有6个阳性细胞，排列规律，稀疏不等；SOX2阳性细胞多见于室管膜，脉络丛上则少见。叠加后显示，外侧隐窝室管膜部可见Nestin和SOX2免疫荧光双标细胞。6BrdU和SOX2免疫荧光双标染色：BrdU阳性细胞显示绿色荧光，SOX2阳性细胞显示红色荧光，免

7、疫荧光双标染色的结果显示：有少量的BrdU阳性细胞分布于脉络丛，室管膜偶见阳性细胞；SOX2阳性细胞多见于室管膜，脉络丛上则少见。叠加后显示，外侧隐窝室管膜部可见BrdU和SOX2免疫荧光双标细胞。中文摘要结论：‘l在第四脑室外侧隐窝室管膜的SOX2阳性细胞分布：腹侧部内侧区的SOX2阳性细胞排列密集而整齐；中间区的阳性细胞排列较松散；外侧区的阳性细胞排列稀疏。背侧部内侧区的SOX2阳性细胞的分布也有所不同，其间有一明显的分界线，分界线内侧的阴性细胞多位于阳性细胞之上；分界线外侧的阳性细胞多位于阴性细胞之上。背侧部外侧区的SOX2阳性细胞与阴性细胞在一层呈间

8、隔排列。2在免疫组织化学染色中Nestin、BrdU