cbs在shr大鼠延髓腹外侧区的表达及意义

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1、CBS在SHR大鼠延髓腹外侧区的表达及意义董金虎河南省南阳市第一人民医院心内科河南南阳473000【摘要】目的探讨硫化氢(H2S)合成酶胱硫^-β-合成酶(CBS)在自发性高血压大鼠(SHR大鼠)延髓外侧区的表达及意义.方法用雄性WKY大鼠作为SHR大鼠同种系正常对照组;免疫印迹方法观察雄性SHR大鼠及雄性WKY大鼠延髓外侧区的CBS表达水平差异.结果CBS在SHR和WKY大鼠中枢延髓腹外侧均有表达(Fig.1・5,Fig.1・6),且17周SHR大鼠CBS的表达水平在延髓腹外侧低于WKY大鼠(p<0.05).结论内源性H2S生成减少可能与原发

2、性高血压的形成有关.【关键词】硫化氢;胱硫醯一β—合成酶;高血压【中图分类号】R743・3【文献标识码】B【文章编号】1008—6315(2015)12-0132-02内源性硫化氢(hydrogensulfide,H2S)是一种具有臭鸡蛋气味的气体,无色有毒•但是通过近20年来的研究，研究者发现H2S是人体内继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后发现的第三类气体信号分子[1],通过深入研究发现内源性H2S与多种心血管系统疾病密切相关[2].内源性H2S在人体内主要由胱硫瞇一β—合酶(CBS)、胱硫—γ—裂解酶(CSE)和

3、半胱氨酸转移酶催化半胱氨酸产牛.CBS主要存在于神经系统内，一般认为，延髓是心血管活动的基木中枢，延髓头端腹外侧部是交感缩血管中枢和心交感中枢所在的部位，观察CBS在SHR大鼠延髓外侧区的表达，判断H2S在自发性高血压的中枢效应.木研究旨在探讨硫化氢(H2S)合成酶胱硫®*-β-合成酶(CBS)在自发性高血压大鼠(SHR大鼠)延髓外侧区的表达及意义.1材料与方法1・1实验动物与主要试剂20只清洁级雄性17周龄自发性高血压大鼠(SHR大鼠)和WKY大鼠20只，体重250-300g(中科院实验动物中心提供).分为WKY大鼠对照组和SHR大鼠组.2组

4、大鼠分笼喂养，自由饮水和摄食.BCA试剂盒(上海碧云天生物公司)，小鼠抗大鼠CBS抗体(Abnova公司).1・2试验方法免疫印迹实验(Western—blot)2组人鼠快速断头处死，取出延髓外侧区，称重，切小块放入管中,加入蛋白质抽提试剂(250mg组织中加入1ml抽提试剂),用匀浆器每次30秒低速匀浆至组织完全裂解,4C、14,000r/min离心15分钟后取上清液，按BCA试剂盒操作说明书操作计算出蛋白浓度•使用BioRad电泳装置，分离蛋白,分离后转移至PVDF膜上•膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合•封闭过的膜加入一-级抗

5、体4I过夜，抗原抗体结合.TBST洗膜3次海次5分钟.加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准，室温孵育膜1小时TBST洗膜3次，每次5分钟.KC化学发光试剂盒中两种试剂等比例混合为反应液•将膜置于反应液中室温孵育3分钟•去除过量的溶液，将膜夹在两塑料薄膜之间，以X光胶片曝光•图片扫描保存为电脑文件，并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化.所测蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值表示CBS含量.1・3统计学处理采用SPSSI3.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(、

6、x??x&plusrrm;s)表示，组间采用单因素方差分析及q检验进行差异显著性分析0・05为差异有统计学意义.2结果结果显示:CBS在SHR和WKY大鼠中枢延髓腹外侧均有表达(Fig.1・5,Fig.1・6),且17周SHR大鼠CBS的表达水平在延髓腹外侧低于WKY大鼠(p05)差异有统计学意义.3讨论现代研究表明,CBS和CSE的表达具有组织特异性•中枢神经系统内,内源性H2S主要由CBS催化生成.实验研究证实，脑组织中生成的H2S可以被CBS抑制剂所阻断，而不被CSE抑制剂所阻断，内源性H2S在CBS缺乏的小鼠中表达明显减少[3].内源性H2S与N

7、O和CO—样，是一种小分子物质，能自由穿越膜结构，不依赖与膜受体发挥作用・H2S在体内有两种存在形式，一种是以未溶解的形式存在，占1/3,另一种是以NaHS的形式存在，占2/3，两种存在形式保持动态平衡.其分子特性决定了H2S能在多环节上参与调控心血管作用•内源性H2S通过能舒张血管平滑肌、抑制血管重塑、减少血管炎性反应和对心脏的负性肌力及负性心率作用，降低血压及延缓高血压的进展[4].近年来有文献报道内源性H2S在大脑对中枢心血管系统有重要的调节作用•研究已证实延髓头端腹外侧部是重要的心血管中枢，它通过整合来自下丘脑室旁核、延髓孤束核等心血管相关核团的

8、投射，是中枢神经系统对心血管活动调节的最后通路[5-7].我们研究结果显示,CB