奥美沙坦通过延髓腹外侧区at1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素ⅱ引发的中枢性升压反应

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1、奥美沙坦通过延髓腹外侧区AT1受体减弱自发高血压大鼠血管紧张素Ⅱ引发的中枢性升压反应：张占帅林英子任冬月朱杰【摘要】目的探讨奥美沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)外源性血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引发的中枢性升压反应的影响以及与延髓腹外侧头端区(RVLM)血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)的关系。方法实验大鼠分为SHR对照组(n=20，正常饮水)、奥美沙坦组(n=20，给予奥美沙坦30mg·kg-1·d-1)和微量注射AngⅡ后三组大鼠的平均动脉压(MAP)不同程度升高，奥美沙坦组MAP升高幅度明显低于SHR组〔(26.3±0.75)vs(47.2±1.41

2、)mmHg，P<0.01〕，但仍高于内AT1受体mRNA平均光密度明显低于SHR组〔(0.94±0.41)vs(2.41±0.37)，P<0.01〕，但高于内AT1受体蛋白平均光密度明显低于SHR组〔(0.51±0.09)vs(0.93±0.07)，P<0.01)〕，但高于组织中AT1受体水平，显著减弱SHRRVLM区微量注射AngⅡ引起的升压反应。【关键词】延髓腹外侧头端;自发性高血压大鼠;血管紧张素Ⅱ1型受体;奥美沙坦延髓腹外侧头端区(RVLM区)是交感输出和血压调节的重要脑区，接受延髓以上心血管中枢和外周传入的多种心血管活动

3、信息，起到维持交感紧张性和稳定血压的作用。RVLM区存在多种神经递质及其相应受体，其中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其AT1受体在该区含量丰富〔1〕。AT1受体与AngⅡ结合兴奋该区血管运动神经元引起交感活动增加，血压升高。因此，AT1受体在RVLM区血压调节中起到关键作用。近几年研究发现高血压动物模型和高血压患者的RVLM区AT1受体密度显著增加，神经元自发活动也增加〔2〕。猜测RVLM区高度表达的AT1受体在高血压的形成和维持中起到重要作用〔3，4〕。又有研究报道，自发性高血压大鼠(SHR)的RVLM区微量注入AT1受体拮抗剂氯沙坦能够减弱静注苯肾

4、上腺素引起的升压反应〔5，6〕，表明氯沙坦可能通过阻断RVLM区AT1受体降低血压。本课题组曾研究发现奥美沙坦能够有效减弱RVLM区微量注射谷氨酸引起的升压反应。因此，设想长期口服奥美沙坦能够通过抑制脑干心血管中枢AT1受体表达，减弱RVLM区注射AngⅡ引发的升压反应。　　1材料与方法　　1.1药品和仪器奥美沙坦(日本Sankyo公司)，AngⅡ(美国Sigma公司)，多道生理记录仪(日本Nihonkohden公司)，立体定位仪(日本Narishige公司)，微操纵仪、微量注射仪(日本Narishige公司)，微电极放大器示波仪(日本Nation

5、al公司)。　　1.2动物SHR40只，区，经微量注射仪分别向三组大鼠单侧RVLM微量注射AngⅡ(100pmol/50nl)，注药速度为1.5nmol/min，观察注药前后大鼠MAP、HR的变化。实验结束后，2%偶氮蓝染剂0.1μl注入到显微注射部位，经左心室依次快速灌流生理盐水150ml和4%多聚甲醛溶液250ml，灌注完毕迅速取脑并放置于4%多聚甲醛溶液中。用冰冻切片机将延髓作50μm的冠状切片，中性红染色，在显微镜下寻找染点，根据Paxinos和内AT1受体mRNA水平标本留置：取SHR、奥美沙坦、区脑组织，液氮速冻。　　总RNA提取：取2

6、00mg脑组织，按Trizol(Invitrogen公司，美国)试剂盒说明书操作。用754紫外分光光度计测定RNA含量。　　RTPCR定量：取5μlRNA经逆转录合成单链cDNA，取2μl逆转录反应产物，94℃预变性1min，94℃30s，57℃30s，72℃1min，30个循环后72℃延伸4min。取扩增产物8μl，琼脂糖凝胶电泳成像并保存结果。引物序列见表1。表1RTPCR引物序列　　1.6测定RVLM内AT1受体水平常规方法制备脑组织蛋白样本，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和电转膜后,5%脱脂奶粉封闭过夜,加入按比例稀释的抗AT1多克隆抗体(

7、1∶600，SantaCruz，USA)或抗βactin单克隆抗体(1∶650，Sigma，USA),37℃作用1h,TTBS洗膜,加入碱性磷酸酶标记的山羊抗兔(1∶1000，SantaCruz，USA)或山羊抗小鼠(1∶1200，Sigma，USA)二抗,室温作用1h后,DAB显色。　　1.7统计学处理实验数据以x±s表示，应用SPSS11.0统计软件，三组间均数比较采用方差分析，两两比较采用q检验。　　2结果　　2.1各组血压状况奥美沙坦治疗4～6d后，奥美沙坦组大鼠收缩压逐渐降至110～120mmHg，随后血压始终保持在这个水平。SHR对照

8、组和微量注射AngⅡ后MAP和HR的变化单侧RVLM微量注射AngⅡ后，MAP不同程度升高。2min时达高峰，给药后15m