中枢延髓头端腹外侧区VGSCs亚型Nav1.6参与应激性高血压的调控机制

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1、中图分类号：Q422单位代号：10280密级：公开学号：15722350硕士学位论文SHANGHAIUNIVERSITYMASTER’SDISSERTATION中枢延髓头端腹外侧区VGSCs题亚型Nav1.6参与应激性高血压目的调控机制作者吴加祥学科专业生物化学与分子生物学导师杜东书副教授完成日期2018年05月上海大学硕士学位论文I上海大学硕士学位论文II上海大学硕士学位论文上海大学理学硕士学位论文中枢延髓头端腹外侧区VGSCs亚型Nav1.6参与应激性高血压的调控机制姓名：吴加祥导师：杜东书副教授学科专业：生物化学与分子生物学上海大学生命科学学

2、院2018年05月III上海大学硕士学位论文ADissertationSubmittedtoShanghaiUniversityfortheDegreeofMasterinScienceTheregulativemechanismofVGSCssubtypeNav1.6onthestress-inducedhypertensionintherostralventrolatralmedullarM.D.Candidate：JiaxiangWuSupervisor：DongshuDuMajor：Biochenmistryandmolecularbiol

3、ogySchoolofLifeScience,ShanghaiUniversityMay,2018IV上海大学硕士学位论文摘要背景：高血压是一种常见的心血管疾病，主要是由遗传，自身生活习惯和环境等多种因素异常所诱发。高血压的特征为动脉血压升高，发病初期并无明显异常，中期出现动脉硬化等病理特征，晚期可引起重要器官过度损伤诱发多种并发症，严重时易导致病患者死亡。现代生活节奏不断加快，工作压力骤然升高，心理应激加剧，机体做出的非特异性反应称为应激，当人类身心长期处于应激状态所导致的高血压，称之为应激性高血压（stress-inducedhypertens

4、ion,SIH）。中枢神经系统在应激介导的心血管疾病中发挥着关键性作用，应激性高血压及其并发症的发生发展与交感神经活动亢进关系密切。延髓头端腹外侧区（rostralventrolateralmedulla，RVLM）是调控心血管活动的关键中枢核团之一，是重要的整合中枢。高血压发生时，RVLM内交感兴奋性神经元过度兴奋导致脊髓中间外侧柱交感节前神经元兴奋性增强，进而参与血压调控和压力反射活动。电压门控钠离子通道（voltage-gatesodiumchannels,VGSCs）作为可兴奋细胞的分子特征，在动作电位的产生和传导过程中起到重要作用。Nav

5、1.6大量分布并表达在中枢神经系统神经元的郎飞节和轴突始端，对于控制神经元兴奋性方面起着至关重要的作用。高血压的中枢调控方面的研究不乏，但中枢RVLM区神经元VGSCs亚型Nav1.6如何参与SIH调控方面的研究“匮乏”。故，本课题主要研究延髓头端腹外侧区神经元钠离子通道亚型Nav1.6表达上调介导下游交感神经亢进，进一步调节应激性高血压的机制。目的：本课题在课题组已有研究基础上，制备应激性高血压大鼠模型，通过整体、电生理、蛋白质印迹、免疫荧光等实验方法研究：1）在应激性高血压大鼠RVLM内Nav1.6区域性表达上调；2）应激性高血压大鼠RVLM内

6、Nav1.6在何种细胞上高表达；3）在应激性高血压大鼠RVLM内Nav1.6与血压心率间的关联及调控血压心率的机理。方法：应激性高血压大鼠模型是通过持续性噪声刺激同时伴随间歇性足底电击（electricalfoot-shocks）正常成年SD雄性大鼠，连续刺激15天来制备。将雄性SD大鼠（230g）随机分为四组：正常对照组（Control）、应激性高血压V上海大学硕士学位论文大鼠组（SIHR）、应激+慢病毒GFP组（Stress+Lv-CRISPR-eGFP）、应激+慢病毒gRNA组（Stress+Lv-CRISPR-gRNA）。清醒和麻醉状态下分

7、别监测收缩压（SBP）、心率（HR）和体重（weight）；麻醉状态下在体记录肾交感神经活动（RSNA）；蛋白印迹和免疫荧光实验法监测VGSCs亚型Nav1.6表达变化。结果：1）应激组大鼠与正常对照组相比，收缩压（SBP）和心率（HR）在应激第5天出现明显的上升，在应激第10天，收缩压达到最高值，体重（weight）增加率在应激前6天明显降低，在第12天后开始高于正常对照组，应激组交感神经活动（RSNA）较空白对照组显著增强；2）与空白对照组相比，大鼠RVLM内Nav1.6蛋白水平在应激发生第10天和第15天显著增加，并且在第10天达到顶峰，应激

8、第10天大鼠RVLM内Nav1.6阳性细胞数显著增多；3）与空白对照相比，应激组大鼠RVLM内Nav1.6与神经元蛋白标记