shrna沉默nnmt表达对人结肠癌ht-29细胞增殖的影响

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1、浙江大学硕士学位论文shRNA沉默NNMT表达对人结肠癌HT--29细胞增殖的影响姓名：李贵玲申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：谢鑫友201202浙江大学硕士学位论文中文摘要shIⅢA沉默NNMT表达对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响浙江大学医学院临床检验诊断学2009级硕士研究生李贵玲导师谢鑫友中文摘要背景：尼克酰胺-N．甲基化酶(NNMT，Ec2．1．1．1)是江腺苷_L蛋氨酸(sAM)依赖的胞质酶，正常表达于人肝脏组织中，其主要的生理功能为催化尼克酰胺和吡啶类物质的甲基化反应，形成吡啶盐．早期的一些研

2、究发现其在帕金森症患者的脑组织及脑脊液中有异常表达，而近来研究发现，其与多种肿瘤关系密切，在肾透明细胞癌、甲状腺乳头状癌、口腔鳞癌、结直肠癌等多种肿瘤组织中存在高表达，但NNMT在肿瘤细胞中过表达的意义或作用机制有待细胞或动物水平实验进行研究．目的：研究NNMT对肿瘤细胞增殖的影响，为肿瘤治疗寻找新的潜在靶点。方法：应用分子克隆技术构建NNMT基因RNm慢病毒载体Ⅻ心仃．RN砧．L，V(1撑、3撑、4扔及对照载体psGFu·RNAi-Nc．LV，并感染人结肠癌HT．29细胞。采用Real．TiInePcR和west锄bl

3、ot分别检测NNMT干扰前后mIⅢA和蛋白水平的表达，MTT法分析NNMT对肿瘤细胞增殖的影响、流式细胞术分析细胞周期和凋亡变化、平板克隆形成试验和裸鼠移植瘤成瘤实验分析细胞致瘤性变化．结果：NNm基因I嫩砧慢病毒载体可显著下调HT．29细胞中№心仃基H浙江大学硕士学位论文中文摘要因mRNA和蛋白的表达，沉默NNMT表达后细胞生长曲线右移、细胞周期表现为删G1期阻滞，细胞早期凋亡增加、平板克隆形成率显著降低、裸鼠体内细胞致瘤性降低．结论：利用删A介导的IⅢ赴技术可有效沉默HT．29细胞中NNMT的表达。NNMT表达下调可

4、有效抑制肿瘤细胞的增殖，这为以NNMT作为靶点治疗该类肿瘤提供了理论依据。关键词：尼克酰胺-N．甲基化酶(Ⅻ弧仃)；大肠癌；删A；HT．29；细胞增殖；肿瘤治疗；IⅡ浙江大学硕士学位论文英文摘要Ef．fectofshRNAsilencingNNMTexpressiononprolil．erationofhumancoloncancerceUH1’．290nDrollIeranon0InUmanCOlonCanCerCe儿H’1．．Z岁C1inicallaboratoⅨtheSIRI㈣RUNSHAWHospital，Col

5、legeofMedicine，ZhejiaIlgUniVers毋Post粤．aduateSupeⅣisor(沁i—LingLiXin．Y．ouXieAbstractobjectiVe：Tostudytllee饿Ctof№州TontuInor融lproli向ation锄dlookforn唧andpot饥tialtarg就sforcancer廿1erapy．Methods：Le而ⅥralVeCtc髑伽‘g娟ng矗竹NNMTwereC0nstnlctedbymoleculardonetechIliqu馏锄dSuccessfhl

6、ill五烈edhum她c010ncaIlcercellHT-29．TheeXpressionsofⅫ心仃州眯A锄dproteinwereidelltifiedbyReal-TimePCRandwestemblotaSsaybeforea11dmerNNMTsileIlced．Theprolif打ationofHT-29cellsw嬲detectedbyMTT嬲say．T11ecellcyCledistributionandapoptosisratewere觚a_lyzedbyflowcytome仃y．Ch觚gesince

7、Htu】：Ilorigemc时abil时were趾alyzedbyplateC0lonyfo肌ationaSsay锄dxeIlo蓼mtumorfo肌ationtestiIlnudemiCe．Results：neeXpressio璐ofmMT蚰ⅢAa11dprot咖inHT一29嘲lswerc确[IlarkablesuppresscdbyleIl：ti、，iralVectors伽?getingforNNMT．ReSultsshowedtllatⅡleCengrowmcurvetumedt0right，cell印optosi

8、srateiIlcrc邪ed觚dccllcyclew弱a∞reStcdatGo／G1phase，w11ilemecolony硒肌ationrate锄dtum耐geci哆abilit)rin删【demiCedecreaSedr锄arkably啦erNNMTsileIlced．Conclusions：111euseof㈣