satb1-shrna下调bc12表达诱导a549细胞凋亡

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1、重庆医科大学硕士学位论文SATB1--shRNA下调Bc12表达诱导A549细胞凋亡姓名：蒋金申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：曹友德201205重庆医科大学硕士研究生学位论文SATBl-shRNA下调BcI2表达诱导A549细胞凋亡摘要目的：应用RNAi干扰技术干扰肺癌A549细胞株中特异性AT序列结合蛋白一1(SpecialAT—richsequence—bindingprotein—I，SATBl)基因的表达，探讨其对A549宝m胞凋亡的影响。方法：设计合成针对SATBl基因的shRNA表达质粒(SATBl一shRNA)。采用阳离子脂质体法将SATBl一shRN

2、A转染入肺癌A549兰m胞。分别采用RT—PCR、Western—Blot法检钡,USATBl一shRNA转染A549细胞中SATBl、Bc12、BAX及Caspase一3的表达。FCM检钡USATBl一shRNA转染的A549细胞凋亡率。结果：经凝胶电泳、DNA测序鉴定分析，成功构建了SATBl一shRNA。RT—PCR和Western—Blot结果显示SATBl一shRNA转染成功后可显著下调A549宝m胞中SATBlmRNA矛FI蛋白的表达水平(P<0．05)。RT—PCR矛lWestern—Blot结果显示Bcl2表达水平下降(P(O．05)，SATBl一shRNA转染组BAX

3、、Caspase一3表达水平上调(P<0．05)。FCM检测结果示SATB1一shRNA转染组细胞凋亡率显著增加(P

4、wn—regulationofSpecialAT-richsequence—bindingprotein一1(SATB1)inducedbyRNAinterference(RNAi)oncellapoptosisofhumanhmgcancercelllineA549andtoexploreitspossiblemechanism．Methods：SATBl一targetedshRNAexpressionplasmid(SATBl一shRNA)wasconstructed．SATBl一shRNAwastransfectedintoA549cellsbyLipofectAMINE2000

5、．3．ThenlRNAsandproteinsexpressionofSATB1，Bcl2，BAXandCaspase一3wereexaminedbyRT—PCRandWestern—Blot，respectively．TheapoptosisrateofA549cellswasdetectedbyFCM．SATB1一shRNAwasconstructedandtransfectedintoA549cellssuccessfully．Results：SATB1一shRNAwerevalidatedbygelelectrophoresisandDNAsequenceanalysis．Th

6、emRNAandproteinexpressionofSATB1wasdecreasedmarkedlyaftertransfectionwithSATB1一shRNAl，P

7、andCaspase一3wasincreasedaftertransfectionwithf，P