mnsod抑制砷诱导小鼠表皮细胞jb6 cl41凋亡的机制研究

《mnsod抑制砷诱导小鼠表皮细胞jb6 cl41凋亡的机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、温州医学院硕士学位论文MnSOD抑制砷诱导小鼠表皮细胞JB6Cl41凋亡的机制研究姓名：张敏申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：高基民；黄传书2012-05温州医学院硕士学位论文摘要MnSOD抑制砷诱导小鼠表皮细胞JB6C141凋亡的机制研究背景与目的：砷是一种公认的环境毒物，经呼吸道、皮肤、消化道等途径进入人体后，可产生急、慢性毒性作用，可以导致肝脏细胞、肾小球细胞、皮肤细胞、生精细胞等的凋亡，对皮肤细胞的影响尤为明显。砷诱导细胞毒性和细胞凋亡反应的重要机制在于干扰细胞呼吸链，使得细胞内活

2、性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)浓度明显升高。超氧阴离子(superoxideanion，02"-)因能形成具有高度活性的羟基自由基，被认为是砷诱导细胞凋亡反应的关键调控蛋白。锰超氧化物歧化酶(ManganeseSuperoxideDismutase，MnSOD)是哺乳动物细胞中三种超氧化物歧化酶之一，能通过夺取线粒体呼吸链中的电子，将超氧阴离子歧化为过氧化氢和氧气，从而达到减轻细胞氧化损伤的目的。但是至今为止，MnSOD对砷诱导细胞凋亡的影响及其机制尚存争议。本课题

3、研究了MnSOD在砷诱导小鼠表皮细胞JB6CBl凋亡中的作用，并深入探讨了其机制。方法：实验将带有绿色荧光蛋白的MnSOD质粒(MnSOD．GFP)转染入小鼠表皮细胞JB6C14I中，使MnSOD得以过表达。用流式细胞术和形态学比较两种方法检测了40肛M砷处理对是否转染MnSOD细胞凋亡的影响，并用蛋白免疫印迹实验检测凋亡相关蛋白；采用蛋白免疫印迹的方法检测了40“M砷处理对是否转染MnSOD细胞中的GADD45a、MKK4／JNK／c．Jun、nucleolin等蛋白的表达情况；采用RT-PC

4、R方法检测了GADD45amRNA的表达水平：采用荧光素酶报告质粒检测了GADD45a基因的转录活性。结果：1、MnSOD可抑制砷诱导的细胞凋亡：40p．M砷处理小鼠表皮细胞JB6C141l温州医学院硕士学位论文后，细胞内02·球度明显升高(49．58％VS．73．14％)，而转染MnSOD可明显抑制02"--的产生(49．44％VS．52．02％)；过表达MnSOD会明显降低砷诱导的细胞凋亡(20．85％VS．1．14％)，并且凋亡相关蛋白caspase．3裂解蛋白的表达水平明显降低。2、Mn

5、SOD可抑制砷诱导的GADD45a表达：GADD45a是调控细胞凋亡的重要蛋白，40gM砷处理后，小鼠表皮细胞JB6C141中的GADD45a蛋白质和mRNA水平均明显升高，而过表达MnSOD可明显抑制两者升高；砷(40pM)处理后，小鼠表皮细胞JB6C141中的GADD45a的mRNA降解速度减慢，但MnSOD可加快GADD45amRNA的降解。表明MnSOD可通过加快GADD45amRNA的降解速率，从而抑制砷诱导GADD45a的表达。3、MnSOD可抑制砷诱导的MKK4／JNK／c．Jun

6、活化，减少GADD45a表达：砷(40pM)处理小鼠表皮细胞JB6C141后，MKK4／JNK／c．Jun信号通路明显激活，而MnSOD可明显抑制砷对MKK4／JNK／c．Jun的活化作用。4、MnSOD可通过促进核仁蛋白的表达，减少GADD45(t表达：核仁蛋白表达受到抑制后，砷(40gM)对小鼠表皮细胞JB6C141中GADD45a的蛋白质和mRNA诱导作用明显增强，表明核仁蛋白可抑制砷诱导的GADD45a表达。而MnSOD过表达可上调核仁蛋白的表达，表明MnSOD可通过上调核仁蛋白的表达，

7、从而抑制砷诱导的GADD45a表达。结论：MnSOD可通过减少砷对小鼠表皮细胞JB6C141中GADD45amRNA降解的抑制作用、抑制砷诱导的MKK4／JNK／c．Jm信号通路活化，促进nucleolin的表达等多条信号途径，减少砷诱导GADD45a表达上调所导致的细胞凋亡。因此，本研究进一步明确了MnSOD对砷诱导细胞凋亡的影响及其作用机制，发现了MnSOD可能通过减少砷暴露所致的细胞凋亡，减轻细胞毒性作用，为将MnSOD用于防治砷中毒提供了新的理论依据。关键词：亚砷酸盐；细胞信号转导；锰超

8、氧化物歧化酶；细胞凋亡；核仁蛋白；生长抑制及DNA损伤诱导基因45a舾}laAbstractTheroleofMnSODinArsenite-inducedJB6C141CellApoptosisBackground&Objective：Arsen妇isawell-documentedenvironmentaltoxicsubstance·Itcanenterthebodvthroughdigestivetract,espiratoryanddermalexposure，leadtoac疵／s曲