bmi1特异性sirna慢病毒载体的构建及其对神经干细胞增殖的影响

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1、Bmil特异性siRNA慢病毒载体的构建及其对神经干细胞增殖的影响计：学位论文：34页表格：2个插图：11幅崔岩指导教师：张波教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：外科学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在

2、论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：整丝签字日期：韭年』月堕El关于学位论文使用授权的说明(Bmil特异性siRNh慢病毒载体的构建及其对神经干细胞增殖的影响》系本人在大连医科大学攻读(博士、硕士)学位期问在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将本论文加入：1．中国学术期刊(光盘版)电子杂志社——《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》及CNKI相关数据库。2．中国科学技术信息研究所——《中国学位论文全

3、文数据库》3．国家图书馆本人授权大连医科大学，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文，可以公布论文的全部或部分内容。论文作者签名：丝指导教师签名：缝淞签字日期：盈监年上月厶日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)刚舌””⋯”“⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯·16(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20(五)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·24(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34Bmil特异性siRNA慢病毒载体的构建及其对神经干细胞增殖的影响硕士生姓名

5、：才旨导教师：专业名称：崔岩张波教授外科学摘要目的：神经干细胞是修复中枢神经系统损伤具有发展前景的工具细胞，但在体外培养易出现细胞衰老，严重影响移植效果。最新研究表明Bmil基因是维持干细胞增殖所必须的一种重要基因，在生理情况下能保持特异靶基因处于稳定的被抑制状态，起到维持细胞存活、生长的重要功能。本研究拟构建Bmil特异性siRNA慢病毒载体并探讨其对人类胚胎纹状体来源神经干细胞增殖的调控作用，为神经干细胞临床应用修复中枢神经系统损伤提供理论依据。方法：本实验首先从8．12周自然流产胎儿的大脑皮层区中有效分离出神经干细胞并在含有丝分裂原的无血清培养基中进行传代培养，通过特异标记物染色

6、(Nestin)以及将神经干细胞向神经元(Tujl)和星形胶质细胞(GFAP)分化来鉴定其为神经干细胞，将神经干细胞分成三组进行实验，即Bmil转染组、GFP空病毒转染组和未经病毒转染组。其次，构建Bmil的慢病毒载体，进行RNA干扰，检测慢病毒转染效率，并通过荧光实时定量PCR的方法检测Bmil基因的干扰后的表达情况。再次，在有效干扰Bmil基因后，通过BrdU掺入率检测细胞的增生能力的改变情况。最后，用B一半乳糖苷酶检测细胞的衰老情况。通过以上数据比较三组神经干细胞的增殖能力以及衰老情况。结果：(1)经Nestin、Tujl、GFAP染色后证明实验所取细胞为神经干细胞。(2)在转染

7、48h后进行显微镜下观察，发现两病毒组转染组的神经干细胞均带有绿色荧光，并且转染效率都超过了90％，对比转染后0h的Bmi．1基因的相对转录水平(99．6+8．25)％，48、72、168h的Bmi．1基因的相对转录水平均下降，数值分别为：(35．6+9．67)％、(26．4+12．05)％和(35．6+10．42)％，差异有统计学意义。(3)检测不同时间点的Bmil干扰后细胞的增殖情况，不同时间点的Bmil干扰组和GFP对照空病毒干扰组的Br