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《p300特异性sirna载体的构建及其对心肌细胞gata4表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、p300特异性siRNA载体的构建及其对心肌细胞GATA4表达的影响基金项目：国家自然科学基金资助项目（30672266），重庆市自然科学基金资助项目（CSTC,2007BB5311）。作者简介：孙慧超(1982-),女，汉，山东省潍坊市人，在读博士研究生，研究方向为心脏发育与先心病发生机制，Tel：13512389453。*通讯作者，田杰，Email：jietian@cqmu.edu.cn,Tel:023-68486767.孙慧超1,田杰1＊,朱静2,吕铁伟1,陈国珍1，李娅莎2（重庆医科大学附属儿童医院1.心脏中心
2、2.儿科研究所，重庆400014）【摘要】目的构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体，并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用，为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础。方法针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建三个重组质粒p300RNAi1，p300RNAi2和p300RNAi3。利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞，分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达，判断抑制效率，并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平。结果转染p
3、SOS-HUS和p300RNAi2的细胞与正常组比较，p300表达无明显变化（P>0.05），而转染p300RNAi1和p300RNAi3的细胞内p300比正常组表达水平降低（P<0.05），心肌特异性基因GATA4的表达水平也明显降低。结论p300特异性siRNA质粒载体构建成功，p300RNAi1和p300RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用，并下调GATA4的表达。【关键词】RNA干扰；p300；心脏；GATA4；表观遗传学；组蛋白乙酰化【中图分类号】R34；R394.8【文献标识码]】AConstruc
4、tionandexpressionofspecificsiRNAplasmidvectorofp300incardiocyteSUNHuichao1,TIANJie1,ZHUJing2,LvTiewei1,ChenGuozhen1，LIYasha2（1DepartmentofHeartCentre,2PediatricInstitute,Children'sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014,China)Abstract:ObjectiveTocon
5、structandscreeneffectivesiRNAplasmidvectorwhichcansuppresstheexpressionofp300inmouse,researchtheregulationofp300knockdownontranscriptionfactorGATA4,andtoestablishthefoundationforthefurtherstudyoftheregulationbyhistoneacetylationmediatedbyp300.MethodsThreerecombi
6、nantplasmidsvectorsinvolvingsiRNA,whichmatchedthebasepairofmousep300perfectly,wereconstructedandtransfectedintoprimarymicecardiocyteculturedinvitro.Theexpressionsofp300andGATA4indifferentgroupsweredetectedbyRT-PCRandimmunofluorescence.ResultsTheexpressionofp300a
7、ndGATA4inexperimentalgrouptransfectedwithp300RNAi1orp300RNAi3wasdepressedobviouslythannormalgroup(P<0.05),whiletherewasnoobviouschangesingroupsofpSOS-HUSandp300RNAi2（P>0.05）.ConclusionTherecombinantplasmidwassuccessfullyconstructed,bothp300RNAi1andp300RNAi3canbl
8、ocktheexpressionofp300effectivelyandcandown-regulatetheexpressionofGATA4.Keywords:RNAinterference;p300;heart;GATA4;epigenetics;histoneacetylationp300是一种转录辅激活因子，也是一种重要
