afp特异性sirna表达载体构建及其在胃癌基因治疗中实验的研究

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1、山东省医学科学院硕士学位论文符号说明缩略词英文全称中文全称AFPalpha-fetoprotein甲胎蛋白APGCalpha-fetoprotein-producinggastric甲胎蛋白阳性胃癌carcmomaDEPCdiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMSodimethylsulfoxide二甲基亚砜ds础姐doublestrandedRNA双链RNA．FU97AFP-producinggastricadenocarcmomacell特异表达AFP的人胃腺癌细胞株mRNAme

2、ssengerribonucleicacid信使核糖核酸CDNAcomplementaryDNA脱氧核糖核酸dNTPdeoxyribonucleosidetriphophate脱氧核苷酸三磷酸bpbasepair碱基对RNAribonucleicacid核糖核酸LBluria-bertani细菌培养基MTT3-(4，5一dimethylthiazol-2-y1)-2，5-dipenyl四唑盐(噻唑蓝)terazoliumbromidePBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液P

3、TGSpost-transcriptionalgenesilencing转录后基因沉默RN』蚯RNAinterferingRNA干涉siRNAsmallinterferingRNA小干扰RNAshRNAsmallhairpinRNA小发夹RNAELISAenzyme—linkedimmunoabsorbemassay酶联免疫吸附实验EBt11idiunbromide7溴化乙锭PCRploymerasechairreaction多聚链式反应GAPDHglyceraldehydesphosphatede

4、hydrogenase磷酸甘油醛脱氢酶VEGFvascul掣endothelialgrowthfactor血管内皮生长因子MVDthemicrovesseldensity微血管密度RISCRNA—inducedsilencingcomplexRNA诱导沉默复合体7学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。学位论文知

5、识产权权属声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属山东省医学科学院。山东省医学科学院享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山东省医学科学院。论文作者签名：銎堕：堡导师签名：日期：皿玉鲨日日期：垒Z年』月2_ff_8Ij山东省医学科学院硕士学位论文AFP特异性siRNA表达载体的构建及其在胃癌基因治疗中的实验研究研究生；郏雁飞指导教师：汪运山中文摘要甲胎蛋111(alpha-fe

6、toprotein，AFP)I自被发现以来，作为一个胎儿异常和肿瘤的标志物，在临床诊断和病情监测等方面发挥了重要作用，其在临床中的意义受到人们的充分研究。然而甲胎蛋白的生理学功能及其在肿瘤发生发展中的生物学作用受到的关注却相对较少，只是在最近十年中人们才意识到甲胎蛋白在肿瘤生长中的调节作用并开始实验研究。甲胎蛋白阳性胃癌(alpha-fetoprotein--producinggastriccarcinoma,APOC)是一种特殊类型的胃癌，特征是AFP升高和及肿瘤组织表达AFP升高，其临床病理学特

7、征与普通型胃癌有较大不同。更易发生肝转移和早期淋巴道转移，具有明显的侵袭性和恶性生物学行为，发病率约占胃癌的5．1*／'o-15％I“。由于APGC患者就诊时多有转移，常不能手术根治切除，切除后也易复发，故寻找新的治疗药物和治疗手段乃当务之急。RNA干扰(RNAinterference，RNAa)是近年来发现和发展起来的一门新兴的在转录水平上的基因阻断技术，是一种双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程。目前，在某些病毒

8、性疾病的治疗研究中己取得了一定的进展，在基因功能研究和基因治疗方面也己显示了巨大的应用前景。鉴于体外合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)费用高，持续作用不能保证，我们首先在体外构建了能在细胞内表达发夹状shRNA的载体，再将载体转染入细胞内，在FU97细胞内转录出siRNA从而引发基因沉默，观察其对FU97细胞AFP基因表达的抑制作用及其对细胞生长抑制及凋亡诱导作用。目的：本研究旨在利用RNAi技术，构建能在细胞内表达AFPshRN