bcl-2基因cpg岛甲基化对鸡与鹌鹑属间杂交种早期胚胎发育的影响

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1、分类号：密级：学号：2009108004单位代码：10759石河子大学硕士学位论文bcl-2基因CpG岛甲基化对鸡与鹌鹑属间杂交种早期胚胎发育的影响学位申请人刘唯依指导教师廖廖和荣（教授）荣教授申请学位门类别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传学所在学院动物科技学院中国〃新疆〃石河子2012年6月Theimpactonembryonicdevelopmentwithearlythebcl-2geneCpGislandmethylationinchicken-quailhybridsADissertationSubmit

2、tedtoShiheziUniversityInFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricμltureByWeiyiLiu(Genetics)DissertationSupervisor:Prof.LiaoHe-rongJune,2012石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡

3、献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月摘要【目的】鸡与鹌鹑属间杂交面临着受精率低和孵化率低等远缘杂交不亲和性，特别是杂交种早期胚胎大量死亡，严重影响鸡与鹌鹑

4、属间杂交的推广应用。本研究在对鸡、鹌鹑及其杂交种胚胎样本进行性别鉴定的基础上，采用与细胞凋亡和增殖相关的bcl-2基因的启动子区CpG岛甲基化检测和荧光定量PCR验证的方法，对比分析bcl-2基因的甲基化程度和基因表达水平，以探讨bcl-2基因甲基化对鸡与鹌鹑属间杂交种早期胚胎死亡的影响作用。【方法】（1）用CHD基因分析鸡、鹌鹑及其杂交种性别比率采集鸡、鹌鹑及其杂交种胚胎胚龄为60h、66h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h、168h（7d）共11个时间点的胚胎组织样并提取基因组DNA，孵化杂交种

5、蛋2465枚，采集胚胎样550枚（每个时间点采集50枚，共11个时间点）,通过PCR的方法选择与性别分化相关的CHD基因进行性别鉴定。（2）用MSP方法对鸡、鹌鹑及其杂交种胚胎组织中bcl-2基因进行甲基化程度检测。采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对鸡、鹌鹑及其属间杂交种早期胚胎发育至60h、66h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h、168h11个不同胚龄胚胎组织bcl-2基因启动子区CpG岛甲基化状态进行检测与对比分析，用甲基化引物扩增出182bp的目的片段即判定为甲基化状态，而用非甲基化引物

6、能扩增出片段长为181bp的目的条带就说明该bcl-2基因发生了非甲基化。【结果】（1）杂交种蛋孵化至60h时其受精率仅能达到13.7%；当母本朝鲜鹌鹑达到其产蛋高峰期时，受精率则有所提高，孵化至156h可达35.7%，总体的平均受精率为22.3%。（2）鸡和鹌鹑胚胎的各时间点雌雄比均趋近于1:1，鸡胚和鹌鹑胚的总体雌性百分率为49.697%和52.424%，与之相对应的二者的总体雄性百分率为50.303%和47.576%，雌雄比平均值比分别约为1和1.04；而杂交种胚胎性别的鉴定结果则与鸡、鹌鹑明显不同，在胚胎发育至72h-168h时平

7、均雄性百分率为72.5%，显然远高于雌性百分率27.5%，所有时间点上的总体雌雄比率为1:4，雌性胚胎枚数有明显差异。（3）正常发育的鸡胚和鹌鹑胚龄在60h、66h、72h、120h大部分样本均呈高甲基化状态，鹌鹑胚胎在96h和108h鹌鹑胚为非甲基化状态，鸡胚在96h和108h仍然为甲基化状态；而鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎在60h、66h、72h、96h、108h和120h则与鸡、鹌鹑明显不同，呈现出甲基化或非甲基化无规律性并存甚至于检测不到甲基化状态，但在84h则只检测到非甲基化状态。【结论】（1）杂交种早期胚胎的雌性胚胎在发育过程中出现

8、性别分化异常而导致大批死亡。（2）杂交种早期胚胎组织中bcl-2基因的甲基化呈异常状态，是影响胚胎发育进程和造成胚胎早期死亡的原因之一。关键词：bcl-2基因;基因甲基化;鸡与鹌鹑；杂交胚胎；