鸡、鹌鹑及其杂交种胚胎ar、er基因的表达差异分析

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1、分类号：密级：学号：2010108007单位代码：10759石河子大学硕士学位论文鸡、鹌鹑及其杂交种胚胎AR、ER基因的表达差异分析学位申请人范丽娜指导教师廖和荣(教授)申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传育种所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2013年6月IIIThedifferentialexpressionofARandERGeneonembryonicdevelopmentwithearlyinchicken-quailhybridsADissertationSubmittedtoShihe

2、ziUniversityInFμlfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricμltureByFanLi-NaWei(Genetics)DissertationSupervisor:Prof.LiaoHe-rongPrLLLof.LiaoHe-rongJune,2013IIIIVV摘要【目的】本研究针对鸡与鹌鹑杂交的后代全为雄性即雌性后代在胚胎发育期全部死亡的的问题，以雄激素受体基因(AR)、雌激素受体基因（ER）为候选基因，在对鸡、鹌鹑及其杂交种进行性别鉴定的基础上，采用荧光定

3、量PCR对AR、ER基因在不同性别、不同时间点的表达水平进行了比较研究，以探讨AR、ER基因的表达对鸡与鹌鹑属间杂交早期胚胎死亡的影响，旨在阐明鸡与鹌鹑属间杂交早期胚胎死亡的分子机理。【方法】对鸡(♂)×鹌鹑（♀）进行人工受精，收集杂交组、鸡(♂)×鸡(♀)组和鹌鹑（♂）×鹌鹑（♀）组种蛋同时入孵，采集胚龄60h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h、168h共10个时间点的胚胎样本并统计受精率。分别提取10个时间点的胚胎基因组DNA并通过对CHD基因的特异性扩增的方法进行性别鉴定。分别选取72h、96

4、h、120h、144h、168h5个时间点的雌雄个体胚胎各5个并提取RNA,用实时荧光定量PCR的方法对AR基因和ER基因的表达量水平进行检测，用统计学方法检验表达差异显著性并分析与杂交种胚胎发育的关联性。【结果】1.受精率的检测结果鸡(♂)×鹌鹑（♀）属间杂交组采集种蛋2605枚,最高受精率为47.37%，最低受精率为22.5%，平均受精率为32.25%，活胚率为42.35%；鸡(♂)×鸡(♀)组共采集胚胎152枚，活胚146枚，受精率为96%；鹌鹑（♂）×鹌鹑（♀）组共采集胚胎62枚，活胚59枚，受精率95%。2.鸡、鹌鹑及其杂交种在

5、不同发育时间的性别比例对142枚鸡、57枚鹌鹑及153枚杂交种未知性别的胚胎进行性别鉴定，结果显示鸡的雌雄比例为0.90:1；鹌鹑的雌雄比例为0.84:1。杂交种的雌雄比例为0.63：1，差异显著。3.鸡、鹌鹑及其杂交种胚胎中AR、ER的表达差异鸡和鹌鹑72-168h早期胚胎组织中的AR、ER基因表达模式分别均相似，但鸡与鹌鹑的杂交种在此期间的表达模式则不同，表明杂交种72-168h早期胚胎中的AR和ER基因的表达呈现出了异常。因此，推测杂交种72-168h早期胚胎组织中的AR、ER基因的异常表达可能引起杂交种胚胎的大量死亡。【结论】鸡与

6、鹌鹑属间杂交种早期胚胎中AR、ER基因的异常表达可能是造成杂交种胚胎早期死亡的重要原因。【关键词】鸡，鹌鹑，杂交种，胚胎发育，AR，ER，表达差异IIIAbstract【Object】Thisstudyaimedatthehybridoffspringsallmalethatisfemaleoffspringsalldeathsduringembryonicdevelopment，astheestrogenreceptorgene(ER)andandrogenreceptor(AR)genecandidategenesinchicken，

7、UsingquantitativePCRtodetectionAR,ERgeneexpressionlevelsindifferentgender,differenttimepointsonthebasisofsexesidentification.ComparativestudytoinvestigatetheAR,ERgeneexpressiontothemechanismofactionofearlydeathinchicken,quailanditshybrids.【Method】Inseminationforchickens(♂

8、)×quail(♀)，thethreegroupsofeggwereincubatedsimultaneously.Theembryoofage60h,72h,84h,96h,108h,120